valg af en Anionudvekslingskolonne

valget af en anionudvekslingskolonne afhænger af en række faktorer, der påvirker kromatografisk adskillelse, herunder ladningskarakteristika for både målmolekyler og andre molekyler i prøven, prøveens volumen og koncentration og strømningshastighed og trykgrænser for kromatografisystemet. Bio – Rad tilbyder et omfattende udvalg af anionudvekslingskolonner, der dækker dine behov. De forskellige typer anionudvekslingskolonner er optimeret til en række applikationer:

bindings-og modtrykegenskaber for unosphere K-understøttelse:
en 5 mg / ml prøve af BSA i 10 mMTris, pH8.5, blev indlæst på en 1,1 * 20 cm søjle. Rød, modtryk; blå, 10% gennembrudskapacitet.

• separationer med høj opløsning
• applikationer fra præparative separationer til polering
• kører ved lave, mellemstore eller høje strømningshastigheder
• dækker forskellige analytstørrelsesområder
• kompatibilitet med almindeligt anvendte buffersystemer og salte
• matricer med enten stærke eller svage funktionelle grupper
• forskellige matriktyper inklusive makroporøs og kontinuerlig ikke-porøs
• lavt modtryk

li>

• kompatibilitet med forskellige prøve viskositeter og driftstemperaturer

anion udveksling kolonne design

ionbytning kromatografi bruges til at adskille ladede molekyler. I en anionudvekslingskolonne er pakningen positivt ladet og bevarer derfor negativt ladede molekyler ved coulombisk interaktion. De bundne molekyler elueres med en aniongradient. For molekyler med flere ladede grupper, såsom proteiner, er det den samlede ladning i en given bufferkemi (pH osv.), der bestemmer, om og hvor stærkt molekylet vil binde til kolonnen stationær fase.

anionudvekslingskromatografikolonner er tilgængelige med matricer med enten stærke eller svage funktionelle grupper. Den svage anionbytningsmatrice er diethylaminoethyl eller DEAE. En mellemstyrkeharpiks, der primært indeholder tertiær med nogle kvaternære aminer, er også tilgængelig.

bufferens pH i kolonnen bestemmer ladningen for hver af bestanddelene i en prøve. Ladningen af stærke anionbytterharpikser ændres minimalt ved en ændring i pH og kan fungere over et bredt pH-område. DEAE påvirkes mere af ændringer i pH med et sædvanligt driftsområde på pH 7-10.

tilgængeligheden af et bredere fungerende pH-område med stærke anionudvekslingskolonner giver mulighed for at bruge pH til at ændre netladningen af målmolekylerne for at få dem til at binde stærkere, svagere eller slet ikke. Kromatografi kan udføres i positiv tilstand, hvor målet(erne) af interesse binder stærkt til søjlen, og (mange) andre molekyler binder ikke så stærkt. Negativ tilstand er almindelig ved polering, hvor forurenende stoffer binder til anionudvekslingskolonnen, og målmolekylet binder ikke og bevares således ikke på søjlen.

eluering opnås normalt med en saltgradient. De mest almindelige ioner er PO43–, SO42–, COO– og Cl–. Valg af anion afhænger af den ønskede elueringsprofil, og hvilke ioner der er kompatible med fremtidig oprensning eller fremtidig brug af analytterne.

anvendelser af Anionudvekslingskolonner

anionudvekslingskolonner anvendes i vid udstrækning til oprensning af biomolekyler. Der er et bredt udvalg af kolonnetyper, størrelser og forskellige styrker af funktionelle grupper. Kombineret med optimerede bindings-og elueringsbetingelser kan anionudvekslingskolonnekromatografi anvendes i alle faser af biomolekylisolering og analyse inklusive indledende oprydning, oprensning, adskillelse af analytter og fjernelse af forurenende stoffer såsom endotoksiner, værtscelleproteiner eller ioniske forbindelser.