hovedformålet Med Negativ farging er å studere den morfologiske formen, størrelsen og arrangementet av bakteriecellene som er vanskelig å flekke. Eg: Spirilla. Det kan også brukes til å flekke celler som er for delikate til å være varmefaste.
Det brukes også til å forberede biologiske prøver for elektronmikroskopi. Det brukes til å vise virus, bakterier, bakteriell flagella, biologiske membranstrukturer og proteiner eller proteinaggregater, som alle har lav elektron-spredningskraft. Det brukes også til studier og identifisering av vandige lipidaggregater som lamellære liposomer (le), inverterte sfæriske miceller (M) og inverterte sekskantede hii-sylindriske (H) faser Ved Negativ farging av transmisjonselektronmikroskopi.
Prinsipp For Negativ Farging
Negativ farging krever et surt fargestoff som India Ink eller Nigrosin.
India Ink eller Nigrosin er en sur flekk. Dette betyr at flekken lett gir opp et hydrogenion (proton) og kromoforen av fargestoffet blir negativt ladet. Siden overflaten av de fleste bakterielle celler er negativt ladet, avviser celleoverflaten flekken. Glasset på lysbildet vil flekke, men bakteriecellene vil ikke. Bakteriene vil dukke opp som klare flekker mot en mørk bakgrunn.
Reagenser Med Negativ Farging
India blekk
Nigrosin
Nigrosin 100 gm / L, Formalin 5 ml / l i vann
Prosedyre For Negativ Farging
1. Plasser en veldig liten dråpe (mer enn en løkke full, mindre enn en fri fallende dråpe fra dropper) av nigrosin nær den ene enden av en godt rengjort og flammet lysbilde.
2. Fjern en liten del av kulturen fra skråningen med en inokulerende løkke og spre den i dråpen av flekken uten å spre dråpen.
3. Bruk et annet rent lysbilde for å spre dråpen flekk som inneholder organismen ved hjelp av følgende teknikk.
4. Hvil den ene enden av det rene lysbildet på midten av lysbildet med flekken. Vipp det rene lysbildet mot dråpen som danner en skarp vinkel og trekk det glir mot dråpen til det berører dråpen og får det til å spre seg langs kanten av sprederen. Opprettholde en liten spiss vinkel mellom lysbildene, skyv sprederen lysbilde mot den rene enden av lysbildet blir farget dra dråpen bak sprederen lysbilde og produsere en bred, selv, tynn smøre.
5. La smøret tørke uten oppvarming.
6. Fokuser et tynt område under oljedyping og observere de unstained cellene omgitt av den grå flekken.
Prosedyre for å vise I Transmisjonselektronmikroskop (TEM)
- Hold en belagt rutenett flim side opp i et par selvklemmetang.
- Lag en 1:1 blanding av prøve og negativ flekk (f.eks. 2% uranylacetat eller 2% natrium-eller kaliumfosfotungtilstand, pH 7,4). Legg til 5 hryvnl til rutenettet. Mindre partikler adsorberer til rutenettet raskere enn større partikler.
Alternativt kan prøven blandet med fiksativ legges til rutenettet før påfølgende negativ farging. - Inkuber i 30-90 sekunder og fjern deretter overflødig væske med den revet kanten av et filterpapir.
- Lufttørk og undersøk i TEM.
Resultater Av Negativ Farging
