välja en Anjonbytarkolonn

valet av en anjonbytarkolonn beror på ett antal faktorer som påverkar kromatografisk separation, inklusive laddningsegenskaperna för både målmolekyl(er) och andra molekyler i provet, provets volym och koncentration och kromatografisystemets flödeshastighet och tryckgränser. Bio-Rad erbjuder ett omfattande utbud av anjonbytarkolumner för att täcka dina behov. De olika typerna av anjonbytarkolumner har optimerats för ett antal applikationer:

bind-och mottrycksegenskaper för UNOsphere Q support:
ett 5 mg / ml prov av BSA i 10 mMTris, pH8.5, laddades på en 1,1 x 20 cm kolumn. Röd, mottryck; blå, 10% genombrottskapacitet.

• högupplösta separationer
• applikationer från preparativa separationer till polering
• körs vid låga, medelstora eller höga flödeshastigheter
• som täcker olika analytstorleksområden
• kompatibilitet med vanliga buffertsystem och salter
• matriser med antingen starka eller svaga funktionella grupper
• olika matristyper inklusive makroporösa och kontinuerliga icke-porösa
• lågt mottryck
• kompatibilitet med olika provviskositeter och driftstemperaturer

anjonutbyteskolonn design

jonbyte kromatografi används för att separera laddade molekyler. I en anjonbyteskolonn är förpackningen positivt laddad och behåller därför negativt laddade molekyler genom coulombisk interaktion. De bundna molekylerna elueras med en anjongradient. För molekyler med flera laddade grupper, såsom proteiner, är det den totala laddningen i en given buffertkemi (pH, etc.) som bestämmer om och hur starkt molekylen kommer att binda till kolonnens stationära fas.

anjonutbyteskromatografikolumner finns med matriser som har antingen starka eller svaga funktionella grupper. Den starka anjonbytarmatrisen är kvartär ammonium och betecknas Q. den svaga anjonbytarmatrisen är dietylaminoetyl eller DEAE. Ett mellanhållfasthetsharts, som huvudsakligen innehåller tertiär med några kvartära aminer, är också tillgängligt.

buffertens pH i kolumnen bestämmer laddningen för var och en av beståndsdelarna i ett prov. Laddningen av starka anjonbytarhartser förändras minimalt genom en förändring i pH och kan fungera över ett brett pH-område. DEAE påverkas mer av förändringar i pH, med ett vanligt driftsområde på pH 7-10.

tillgängligheten av ett bredare fungerande pH-område med starka anjonbytarkolumner ger möjlighet att använda pH för att ändra nettoladdningen för målmolekylerna för att få dem att binda starkare, svagare eller inte alls. Kromatografi kan utföras i positivt läge, där målet / målen av intresse binder starkt till kolonnen och (många) andra molekyler binder inte lika starkt. Negativt läge är vanligt vid polering, där föroreningar binder till anjonbytarkolonnen och målmolekylen inte binder och därmed inte behålls på kolonnen.

eluering uppnås vanligtvis med en saltgradient. De vanligaste jonerna är PO43–, SO42–, COO– och Cl–. Valet av anjon beror på den önskade elueringsprofilen och vilka joner som är kompatibla med framtida rening eller framtida användning av analyten(erna).

tillämpningar av Anjonbytarkolumner

Anjonbytarkolumner används i stor utsträckning för rening av biomolekyler. Det finns ett brett urval av kolumntyper, storlekar och olika styrkor hos funktionella grupper. Kombinerat med optimerade bind-och elueringsförhållanden kan anjonbyteskolonnkromatografi användas i alla stadier av biomolekylisolering och analys inklusive initial rengöring, rening, separation av analyter och avlägsnande av föroreningar såsom endotoxiner, värdcellproteiner eller joniska föreningar.