studieplats och ämnesscreening

kliniska prövningar genomfördes vid Clinical Research Center vid University of Michigan sjukhus med godkännande från Institutional Review Board för studier med mänskliga ämnen och från Food and Drug Administration. Informerat samtycke erhölls från varje ämne.

försökspersoner bedömdes enligt ålder, vikt och förmåga att följa protokollen. De screenades för hälsa / sjukdom och användning av mediciner, alkohol och tobak. Blod bedömdes för elektrolytbalans, njur-och leverfunktion och blodmorfologi och lipider. De erforderliga ingångskoncentrationerna för mechanism-studien var 5, 18 mmol l−1 (>200 mg dl−1) totalt kolesterol, 4, 14 mmol l−1 (>160 mg dl−1) lipoproteinkolesterol med låg densitet (LDL-kolesterol) och 3.39 mmol l−1 (300 mg dl−1) triglycerider. För den långsiktiga studien krävdes totalt kolesterol att vara 5, 18-7, 77 mmol l−1 (200-300 mg dl−1), LDL-kolesterol 3, 37 mmol l−1 (>130 mg dl−1) och triglycerider 4, 52 mmol l−1 (200 mg dl−1). Kvinnor i fertil ålder screenades för graviditet och instruerades att använda preventivmedel under studien.

Mekanismstudie

av de 12 försökspersonerna var åtta kvinnor med medelålder 39,5 (intervall, 29-59) år, genomsnittligt totalt kolesterol 6,48 (intervall, 5,57–7.51) mmol l – 1 (250 (intervall, 215-290) mg dl−1) och medelvikt 79,3 (intervall, 58,3–116,3) kg. Motsvarande värden för de fyra männen var 36,5 (intervall, 34-40) år, 6,60 (5,57–7,64) mmol l−1 (255 (intervall, 215-295) mg dl−1) totalt kolesterol och 94,5 (intervall, 84,5–106,8) kg.

det fanns fyra 1-veckors studiefaser, med en 1-veckors tvättperiod mellan faserna. I varje fas—administrerad enligt en randomiserad, enblind, crossover-design—konsumerade ämnen 250 ml av en sockerfri gelatindessert innehållande antingen 5 g HPMC (testfaser) eller ingen HPMC (placebofas). Gelatindesserten konsumerades under frukost, lunch och middag, för totalt 15 g HPMC per dag under varje testfas.

viskositeter (mätt enligt United States Pharmacopeia, 2003) av gelatindesserten från de fyra faserna var: placebogelatin (0, 3 cP), HPMC med medelviskositet (3915 cP), HPMC med hög viskositet (22 703 cP) och HPMC med ultrahög viskositet (63 030 cP). Alla HPMC-produkter (Dow Chemical Company, Midland, MI, USA) var livsmedelskvalitet och följde monografin hypromellos Typ 2208 (United States Pharmacopeia, 2003).

matintaget kontrollerades under hela mekanismstudien för att säkerställa att den enda dietskillnaden mellan grupper var närvaron eller frånvaron av HPMC. Ämnen åt alla måltider på General Clinical Research Center och valde måltider som motsvarar deras vanliga kost. I studievecka 1 inventerades all konsumerad mat. I efterföljande faser reproducerades typerna och kvantiteterna av konsumerad mat.

på dag 1 och 8 i varje fas, efter en snabb natt, mättes vikt, vitala tecken och serumlipider. Elektrolyter, lever-och njurfunktion och blodmorfologi mättes under de första och sista studiedagarna.

effekten av HPMC på fettabsorption studerades genom mätning av fekalt fettinnehåll. Under placebo-och ultrahögviskositetsfaserna slutförde alla försökspersoner en 72-timmars pallsamling dag 5, 6 och 7.

långtidsstudie

av de 40 försökspersonerna var 20 kvinnor med medelålder 41,6 (intervall, 27,3-55,9) år, genomsnittligt serumkolesterol 5,96 (intervall, 5,43–6,48) mmol l–1 (230,0 (intervall, 209,8−250,2) mg dl–1), genomsnittligt LDL−kolesterol 4,05 (intervall 3,57-4,53) mmol l–1 (156.4 (intervall 137,9–174,9) mg dl−1) och medelvikt 75,3 (intervall, 59,8–90,8) kg. Motsvarande värden för de 20 männen var 38,3 (intervall, 25,9–50,3) år, 6,05 (intervall, 5,46–6,63) mmol l−1 (233,4 (intervall, 210,9–255,9) mg dl−1) totalt kolesterol, 4,26 (intervall, 3,74–4,78) mmol l−1 (164,4 (intervall, 144,4–184,4) mg dl−1) LDL-kolesterol och 87,9 (intervall, 75,7–101,1) kg vikt.

två doser, 5 och 15 g dag−1, med ultrahög viskositet HPMC jämfördes med placebo för kolesterolsänkande förmåga hos mildt hyperkolesterolemiska personer, med användning av en randomiserad, dubbelblindad, placebokontrollerad, parallell design. HPMC administrerades i en varm chokladdryck med frukost (5 och 15 g dag−1 behandlingsgrupper) och i sockermelass kakor med lunch och middag (15 g dag-1 behandlingsgrupp). Cookieformuleringen beskrivs i Swidan et al. (1996).

antalet försökspersoner i varje behandlingsgrupp bestämdes genom effektberäkningar baserade på förväntad kolesterolsänkande effekt vid de två doserna (uppskattad till 1% per g HPMC per dag) och tidigare observerade variationskoefficienter i totalkolesteroldata. Även om effektberäkningar indikerade att fem ämnen skulle vara tillräckliga, registrerades 10 för 15 g HPMC per daggrupp och 10 för placebogruppen, för att ta hänsyn till den lägre hydratiseringshastigheten för HPMC i kakorna och längden på studien. Tjugo försökspersoner registrerades för 5 g HPMC per dag grupp eftersom den kolesterolsänkande effekten förväntades vara mer blygsam.

den varma chokladdrinken innehållande 5 g HPMC accepterades inte av försökspersonerna, som omedelbart klagade högt över dess icke-smaklighet och hotade att överge studien i slutet av Vecka 1. Därefter åberopades en 1-veckors tvättperiod för alla försökspersoner (vecka 2) och från och med vecka 3 fick alla försökspersoner 5 g HPMC-kakaformulering i stället för 5 g HPMC-varm chokladdryck vid frukost. Ämnen som fick placebo byttes till en placebokaka i stället för placebo varm choklad för att upprätthålla bländande. Det fanns inga efterföljande klagomål om smaklighet. Protokollet för den långsiktiga studien presenteras i Tabell 1.

långtidsstudien var en poliklinisk studie, med försökspersoner som rapporterade dagligen för att hämta sin dryckmix (vecka 1), kakor (vecka 1, 3-8) och eventuella formulär som behövs. Ämnen konsumerade sina vanliga måltider tillsammans med studieformuleringarna. Mat-och träningsdagböcker registrerades 1 vecka före studien och under veckorna 1, 4 och 8. Överensstämmelse med konsumtionen av testformuleringarna bedömdes dagligen.

analys av prover och frågeformulär

biokemiska och lipidmätningar utfördes vid kliniska laboratorier vid University of Michigan sjukhus, med användning av en validerad metod som uppvisar 1% variation i total kolesterol (TC) koncentration inom provet och 2,2% variation mellan dagar. LDL-C beräknades från TC, högdensitetslipoproteinkolesterol (HDL-C) och TG-koncentrationer med användning av formeln:

Pallsamlingar analyserades av Mayo Clinic (Rochester, MN, USA) med användning av en NMR-baserad procedur som involverar mikrovågstorkning, följt av uppskattning av procent fast och procent fett via signalanalys av de återstående protonerna (Van De Kamer, 1958). Jämfört med den etablerade, standard gravimetriska metoden skilde sig värdena för procent fast och fettinnehåll med 2 respektive 6%.

frågeformulär om biverkningar slutfördes dag 1 i båda studierna, dag 7 i varje fas i mekanismstudien och dag 7 under vecka 1, 3 och 6 i långtidsstudien. Ämnen fick huvudvärk, hjärtklappning, yrsel, uppblåsthet, gastrointestinalt obehag, magkramper, diarre och flatulens enligt följande: ingen effekt (0), mild effekt (1=mindre än 30 min, 2=mer än 30 min), måttlig effekt (3=mindre än 30 min, 4=mer än 30 min) och svår effekt (5=mindre än 30 min och 6=mer än 30 min). Utrymme tillhandahölls också för försökspersoner för att registrera andra biverkningar.

tarmrörelsens antal och konsistens rapporterades dag 5, 6 och 7 i placebo-och ultrahögviskositetsfaserna i mekanismstudien. Tarmrörelsens konsistens gjordes enligt följande: 1 (flytande), 2 (lös, mjuk, fragmenterad avföring), 3 (mjuk men kontinuerlig avföring), 4 (fast avföring) eller 5 (svårighet att passera på grund av styvhet).

statistisk analys

i mekanismstudien testades alla mått, utom fekalt fett, för signifikanta skillnader med upprepade måttanalys av varians (SuperAnova, Abacus Concepts, Berkeley, CA, USA) med hjälp av Tukeys kompromiss som ett post hoc-test. Fekalfettdata analyserades med det parade t-testet.

i den långsiktiga studien behandlades data med univariat (till exempel den ojusterade univariata f-statistiken) och multivariat (till exempel Wilks Lambda) upprepade måttanalys av varians med hjälp av ett SAS statistiskt analyspaket (SAS Institute Inc., Cary, NC, USA). De två metoderna gav liknande resultat. Faktorer som analyserades var vecka (inom ämnet) och behandlingsgrupp, kön och ålder (mellan ämnen). Nollhypoteserna var att ingen vecka, vecka för kön, vecka för ålder eller vecka för grupp interaktioner fanns.

alla skillnader ansågs signifikanta vid 95% konfidensnivå.