Discusión y Conclusión
Las células inmunocompetentes y sus precursores experimentan una serie compleja de eventos cuando se les desafía con un antígeno para proliferar y sintetizar anticuerpos o participar en las respuestas inmunitarias celulares. En el caso de la infección por virus, se ha aceptado ampliamente que la inmunidad humoral o mediada por células al virus y los antígenos asociados al virus son altamente protectores, aunque en algunos casos las lesiones inmunopatológicas ocurren debido a una respuesta de tipo «autoinmune» al antígeno inducido por el virus en el tejido diana. Sin embargo, los tipos contrastantes de interacción de un virus con los inmunocitos, es decir, depresión o alteración de la respuesta inmunitaria, han sido mucho menos estudiados que las interacciones que resultan en inmunidad antivirus. En este sentido, los virus de la leucemia murina se han estudiado en los últimos años en términos de efectos sobre las respuestas inmunitarias (1-6). Es cada vez más evidente que los virus de la leucemia pueden afectar preferentemente a los inmunocitos y precursores, desviando estas células de las vías de respuesta inmunitaria normal.
En los estudios descritos aquí, se utilizó el complejo del virus de la leucemia Friend para examinar la naturaleza de las interacciones virus-linfocitos, tanto in vivo como in vitro. Sin embargo, los estudios in vivo sufren de los problemas que tales virus no solo pueden replicarse en el tejido linfoide, sino obviamente en otros tejidos. Además, el patrón de tráfico alterado de células infectadas hacia los órganos linfoides, así como dentro de los órganos, agrega una gran complejidad al análisis de los efectos del virus en los inmunocitos. Se reconoce ampliamente que los linfocitos infectados por virus pueden mostrar una capacidad de localización anormal, de modo que se interrumpe el patrón normal de tráfico (17,18). Esto podría explicar los principales cambios en la arquitectura de los órganos linfoides de los animales infectados por el virus de la leucemia. Además, la infección por virus per se puede inducir antígenos que son «extraños» a las células linfoides normales y aún no afectadas, que luego pueden responder de manera perjudicial a los linfocitos infectados. Por lo tanto, una lesión de tipo «autoinmune» puede ocurrir debido a la infección por virus in vivo. Sin embargo, los estudios en este laboratorio, así como en otros, han demostrado claramente que las cepas susceptibles de ratones infectados con un virus de leucemia muestran una respuesta de anticuerpos marcadamente deprimida a antígenos dependientes de T, como SRBC. En otros estudios se ha demostrado inmunosupresión a antígenos dependientes de T. Además, inmunidad celular demostrada por la respuesta a antígenos micobacterianos, aloantígenos, etc., también puede estar marcadamente deprimido en animales infectados por oncornavirus.
Aunque algunos investigadores consideraron anteriormente que tal respuesta inmunitaria deprimida puede reflejar el «desplazamiento» de los inmunocitos normales por las células leucémicas transformadas, los estudios cinéticos indicaron que la depresión de la inmunidad se desarrolla mucho antes de que se manifiesten alteraciones marcadas de la arquitectura de las células linfoides o síntomas de enfermedad. Parece plausible que el virus pueda infectar las células B o sus precursores y desviarlos de la vía normal de respuesta inmunitaria. Varios estudios han sugerido que las células precursoras de anticuerpos pueden ser un objetivo preferencial para MuLV y que una vez que se produce la infección por el virus, dichos inmunocitos ya no son competentes para responder al antígeno y se transforman en una célula inmunocompetente. Varios estudios de transferencia celular respaldaron este punto de vista, ya que la capacidad de las células linfoides para montar una respuesta inmunitaria en ratones receptores irradiados disminuyó notablemente cuando los animales donantes estaban infectados previamente con el virus. No parecía probable que el virus se transfiriera a los receptores, especialmente porque varios controles mostraron que el virus FLV no se replicaba bien en los receptores irradiados.
Los estudios ultraestructurales con bazos infectados respaldaron la opinión de que las células precursoras inmunocompetentes se veían afectadas principalmente por la infección vírica. Sin embargo, las marcadas ventajas de los estudios in vitro sugirieron que el análisis de la interacción de un virus de leucemia con cultivos de células linfoides podría proporcionar información valiosa sobre la naturaleza de los efectos del virus de la leucemia en las respuestas inmunitarias. Con este fin, se han realizado una amplia variedad de experimentos utilizando cultivos in vitro de esplenocitos infectados por virus normales y de leucemia. El deterioro de la formación de anticuerpos por parte de los esplenocitos de ratones normales infectados con FLV no fue de naturaleza finita, ya que dichos esplenocitos no respondieron al antígeno incluso cuando se cultivaron in vitro. Sin embargo, en experimentos recientes se ha encontrado que tales cultivos celulares deprimidos podrían restaurarse a una respuesta de anticuerpos normal o casi normal mediante estimulación con una variedad de agentes, incluidos los LPS bacterianos. Además, el cultivo conjunto de esplenocitos infectados con un número óptimo de células exudadas peritoneales ricas en macrófagos restauró la respuesta inmune. Por lo tanto, parecía plausible que la infección por FLV pudiera estar alterando la función o el número de macrófagos, al menos en términos de respuesta a SRBC.
Debe tenerse en cuenta que las células del bazo de animales infectados, cuando se agregan en cantidades relativamente pequeñas a cultivos de células de bazo normales, dan lugar a una respuesta de anticuerpos deprimida. Tal supresión fue evidente incluso con una proporción tan baja como 1:50 para los esplenocitos de donantes infectados a donantes normales. Además, incluso cuando los esplenocitos infectados se separaron de las células del bazo normales por membranas impermeables celulares, todavía se producía inmunosupresión marcada. Tal supresión, sin embargo, podría bloquearse mediante la adición de suero anti-FLV a cualquiera de las cámaras, lo que indica que el suero probablemente impidió que las células infectadas liberaran un agente a través de la membrana, presumiblemente un virus, o podría proteger a los esplenocitos diana normales de ser alterados por el material que atraviesa la membrana. Extractos libres de células clarificadas de esplenocitos infectados por el virus de la leucemia, cuando se agregan a las células normales del bazo, también suprimen notablemente la respuesta inmunitaria.
Los extractos clarificados contenían virus infecciosos, como se ha demostrado mediante ensayos in vivo e in vitro adecuados. El antisuero al virus previno el efecto supresor de los extractos clarificados. En estudios anteriores, sin embargo, se había encontrado que los extractos no aclarados ricos en virus no suprimían la respuesta inmune esperada de cultivos de células de bazo normales in vitro. Parecía probable que los extractos no aclarados contuvieran no sólo virus infecciosos, sino también virus no infecciosos y desechos. Por lo tanto, en estudios adicionales, se agregaron pequeñas cantidades de extractos clarificados a cultivos de células de bazo normales. No se produjo depresión de la respuesta inmune, incluso si posteriormente se añadió el virus clarificado. Sin embargo, si los extractos libres de células no aclaradas se sometían primero a ultracentrifugación, se separaba el virus infeccioso, lo que podía suprimir la respuesta inmunitaria, mientras que el gránulo no infeccioso, que contenía restos asociados al virus y, presumiblemente, virus no infeccioso, bloqueaba la inmunosupresión. Por lo tanto, parece probable que en cultivo el virus infeccioso pueda competir con virus no infecciosos o antígenos asociados a virus por los receptores de los inmunocitos o sus precursores. Si esto es correcto, entonces parece probable que dichos receptores en los inmunocitos sean responsables de la unión del virus infeccioso que, tras el contacto con el inmunocito, penetra y se replica. Esto daría lugar a la inactivación de la función normal de la célula o a la interrupción de la capacidad de la célula para responder al antígeno. El examen microscópico fluorescente de cultivos de esplenocitos infectados con virus in vitro, así como la microscopía electrónica, apoyan esta opinión, ya que se producen alteraciones marcadas en las células que normalmente se espera que muestren antígenos de superficie Ig y theta. Además, el número de células linfoides que exhiben antígeno FLV en su superficie aumentó in vitro después de la infección, concomitantemente con un deterioro de la respuesta inmunitaria a SRBC. Los estudios ultraestructurales, especialmente los de SEM, confirmaron la marcada alteración del tipo celular tanto in vivo como in vitro. La aparición de células linfoides de superficie lisa más grandes con características de superficie marcadamente alteradas, incluida la aparición de numerosas manchas superficiales que se han relacionado con sitios de replicación del virus, estaba directamente relacionada con la infección.
Los estudios adicionales sobre la interacción entre los virus de la leucemia, especialmente los componentes virales purificados de los complejos oncornavirus, deben proporcionar información adicional sobre cómo reacciona un virus con varios tipos de células del sistema de respuesta inmune. Tales estudios deben ser valiosos no solo para analizar la naturaleza de la leucemogénesis inducida por virus, sino que, sin duda, continuarán proporcionando una herramienta útil para diseccionar varios parámetros de respuesta inmune.