Selección de una Columna de Intercambio de Aniones

La elección de una columna de intercambio de aniones depende de una serie de factores que afectan la separación cromatográfica, incluidas las características de carga de ambas moléculas diana y otras moléculas de la muestra, el volumen y la concentración de la muestra, y los límites de caudal y presión del sistema de cromatografía. Bio-Rad ofrece una amplia gama de columnas de intercambio de aniones para cubrir sus necesidades. Los diferentes tipos de columnas de intercambio de aniones se han optimizado para una serie de aplicaciones:

Propiedades de unión y contrapresión de UNOsphere Q soporte:
Una muestra de BSA de 5 mg/ml en 10 mMTris, pH8.5, se cargó en una columna de 1,1 x 20 cm. Rojo, contrapresión; azul, capacidad de avance del 10%.

• Separaciones de alta resolución
• Aplicaciones desde separaciones preparativas hasta pulido
• Funcionando a caudales bajos, medios o altos
• Cubriendo diferentes rangos de tamaño de analitos
• Compatibilidad con sistemas tampón y sales de uso común
• Matrices con grupos funcionales fuertes o débiles
• Diferentes tipos de matrices, incluidos macroporosos y no porosos continuos
• Baja contrapresión
• Compatibilidad con diferentes viscosidades de muestra y temperaturas de funcionamiento

Diseño de columna de intercambio de aniones

Intercambio iónico la cromatografía se utiliza para separar moléculas cargadas. En una columna de intercambio de aniones, el embalaje está cargado positivamente y, por lo tanto, retiene moléculas cargadas negativamente por interacción coulombica. Las moléculas unidas se eluyen con un gradiente de aniones. Para moléculas con múltiples grupos de carga, como las proteínas, es la carga total en una química tampón dada (pH, etc.).) que determina si y con qué fuerza la molécula se unirá a la fase estacionaria de la columna.

Las columnas de cromatografía de intercambio de aniones están disponibles con matrices que tienen grupos funcionales fuertes o débiles. La matriz de intercambio de aniones fuerte es amonio cuaternario, y se denomina Q. La matriz de intercambio de aniones débil es dietilaminoetil, o DEAE. También está disponible una resina de resistencia intermedia, que contiene principalmente aminas terciarias con algunas aminas cuaternarias.

El pH del tampón de la columna determina la carga de cada uno de los componentes de una muestra. La carga de las resinas intercambiadoras de aniones fuertes se altera mínimamente por un cambio en el pH y puede funcionar en un amplio rango de pH. DEAE se ve más afectado por los cambios en el pH, con un rango de funcionamiento habitual de pH 7-10.

La disponibilidad de un rango de pH de trabajo más amplio con columnas de intercambio de aniones fuertes proporciona la capacidad de usar el pH para cambiar la carga neta de las moléculas objetivo para que se unan más fuerte, más débilmente o no se unan en absoluto. La cromatografía puede llevarse a cabo en modo positivo, donde el objetivo(s) de interés se fijan fuertemente a la columna y (muchas) otras moléculas no se unen fuertemente. El modo negativo es común en el pulido, donde los contaminantes se unen a la columna de intercambio de aniones y la molécula objetivo no se une y, por lo tanto, no se retiene en la columna.

La elución se logra generalmente con un gradiente de sal. Los iones más comunes son PO43–, SO42–, COO– y Cl–. La elección del anión depende del perfil de elución deseado y de qué iones son compatibles con la purificación futura o el uso futuro del analito o analitos.

Las aplicaciones de columnas de intercambio de Aniones

Las columnas de intercambio de aniones se utilizan ampliamente para la purificación de biomoléculas. Hay una amplia selección de tipos de columnas, tamaños y diferentes fortalezas de grupos funcionales. En combinación con condiciones optimizadas de unión y elución, la cromatografía de columna de intercambio de aniones se puede utilizar en todas las etapas del aislamiento y análisis de biomoléculas, incluida la limpieza inicial, la purificación, la separación de analitos y la eliminación de contaminantes como endotoxinas, proteínas de células huésped o compuestos iónicos.