Anioninvaihtokolonnin valitseminen

anioninvaihtokolonnin valinta riippuu useista tekijöistä, jotka vaikuttavat kromatografiseen erotukseen, mukaan lukien sekä kohdemolekyylien että muiden näytteen molekyylien varausominaisuudet, näytteen tilavuus ja pitoisuus sekä kromatografiajärjestelmän virtausnopeus-ja painerajat. Bio-Rad tarjoaa laajan valikoiman anioninvaihtopylväitä kattamaan tarpeesi. Erityyppisiä anioninvaihtopylväitä on optimoitu useisiin sovelluksiin:

Unosphere Q-tuen sitovuus-ja vastapaineominaisuudet:
5 mg/ml BSA-näyte 10 mMTris: ssä, pH8.5, ladattiin 1, 1 x 20 cm: n sarakkeeseen. Punainen, vastapaine; sininen, 10% läpilyöntikapasiteetti.

• korkean resoluution erotukset
• Sovellukset preparatiivisista erotuksista kiillotukseen
• käynnissä matalilla, keskisuurilla tai suurilla virtausnopeuksilla
• kattaen eri analyyttiset kokoluokat
• Yhteensopivuus yleisesti käytettyjen puskurijärjestelmien ja suolojen kanssa
• matriisit, joissa on joko vahvoja tai heikkoja funktionaalisia ryhmiä
• eri matriisityypit mukaan lukien makroporiset ja jatkuvat huokoiset
• Alhainen vastapaine
• yhteensopivuus eri näytteen viskositeettien ja käyttölämpötilojen kanssa

anioninvaihtopylvään rakenne

ioninvaihto kromatografiaa käytetään varautuneiden molekyylien erottamiseen toisistaan. Anioninvaihtopylväässä pakkaus on positiivisesti varautunut ja säilyttää siten negatiivisesti varautuneita molekyylejä coulombisen vuorovaikutuksen avulla. Sitoutuneet molekyylit eluoidaan anionigradientilla. Molekyyleille, joissa on useita varautuneita ryhmiä, kuten proteiineja, se on kokonaisvaraus tietyssä puskurikemiassa (pH jne.), joka määrittää, sitoutuuko molekyyli kolonnin stationäärifaasiin ja kuinka voimakkaasti.

anioninvaihtokromatografiakolonneja on saatavilla matriiseilla, joissa on joko vahvoja tai heikkoja funktionaalisia ryhmiä. Vahva anioninvaihtomatriisi on kvaternaarinen ammonium, ja siitä käytetään nimitystä Q. heikko anioninvaihtomatriisi on dietyyliaminoetyyli eli DEAE. Saatavilla on myös välivahvuinen hartsi, joka sisältää pääasiassa tertiäärisiä ja joitakin kvaternaarisia amiineja.

sarakkeessa olevan puskurin pH määrittää kunkin näytteen aineosan varauksen. Voimakkaiden anioninvaihtohartsien varaus muuttuu minimaalisesti pH: n muuttuessa ja voi toimia laajalla pH-alueella. DEAE: hen vaikuttavat enemmän pH: n muutokset, joiden tavanomainen toiminta-alue on pH 7-10.

laajemman työ pH-alueen saatavuus vahvoilla anioninvaihtopylväillä antaa mahdollisuuden pH: n avulla muuttaa kohdemolekyylien nettovarausta niin, että ne sitoutuvat voimakkaammin, heikommin tai eivät lainkaan. Kromatografia voidaan suorittaa positiivisessa tilassa, jossa kiinnostavat kohteet sitoutuvat voimakkaasti kolonniin ja(monet) muut molekyylit eivät sitoudu yhtä voimakkaasti. Negatiivinen tila on yleinen kiillotuksessa, jossa vierasaineet sitoutuvat anioninvaihtopylvääseen eikä kohdemolekyyli sitoudu eikä siten säily kolonnissa.

eluointi saavutetaan yleensä suolagradientillä. Yleisimmät ionit ovat PO43–, SO42–, COO– ja Cl–. Anionin valinta riippuu halutusta eluutioprofiilista ja siitä, mitkä ionit ovat yhteensopivia analyytin(analyytien) tulevan puhdistuksen tai tulevan käytön kanssa.

Anioninvaihtopylväiden sovelluksia

anioninvaihtopylväitä käytetään laajasti biomolekyylien puhdistamiseen. Palstatyyppejä, kokoja ja funktionaalisten ryhmien eri vahvuuksia on laaja valikoima. Yhdistettynä optimoituihin Sidonta-ja eluutioolosuhteisiin anioninvaihtopylväskromatografiaa voidaan käyttää biomolekyylien eristämisen ja analysoinnin kaikissa vaiheissa, mukaan lukien alustava puhdistus, puhdistus, analyyttien erottaminen ja epäpuhtauksien, kuten endotoksiinien, isäntäsoluproteiinien tai ioniyhdisteiden poisto.