tutkimuspaikan ja koehenkilön seulonta

kliiniset tutkimukset tehtiin Michiganin yliopiston sairaaloiden kliinisessä tutkimuskeskuksessa Institutional Review Board for Studies with human Subjects and the food and Drug Administrationin hyväksynnällä. Jokaiselta tutkittavalta saatiin tietoon perustuva suostumus.

koehenkilöt arvioitiin iän, painon ja tutkimussuunnitelmien noudattamiskyvyn mukaan. Heiltä seulottiin terveys / sairaus sekä lääkkeiden, alkoholin ja tupakan käyttö. Verestä arvioitiin elektrolyyttitasapaino, munuaisten ja maksan toiminta sekä veren morfologia ja lipidit. Mekanismitutkimuksessa vaaditut sisäänpääsypitoisuudet olivat 5, 18 mmol l−1 (>200 mg dl−1) kokonaiskolesteroli, 4, 14 mmol l−1 (>160 mg dl−1) alhaisen tiheyden lipoproteiinikolesteroli (LDL-kolesteroli) ja 3.39 mmol l−1 (⩽300 mg dl−1) triglyseridejä. Pitkäaikaistutkimuksessa kokonaiskolesterolin määräksi tuli 5, 18−7, 77 mmol l−1 (200-300 mg dl−1), LDL−kolesterolin 3, 37 mmol l−1 (>130 mg dl−1) ja triglyseridien 4, 52 mmol l-1 (⩽400 mg dl-1). Hedelmällisessä iässä olevat naiset seulottiin raskauden varalta ja ohjeistettiin käyttämään ehkäisyä tutkimuksen aikana.

Mekanismitutkimus

12 tutkittavasta kahdeksan oli naisia, joiden keski–ikä oli 39, 5 vuotta (vaihteluväli 29-59 vuotta), kokonaiskolesterolin keskiarvo 6, 48 (vaihteluväli 5, 57-7.51) mmol l−1 (250 (vaihteluväli 215–290) mg dl-1) ja keskimääräinen paino 79, 3 (vaihteluväli 58, 3-116, 3) kg. Vastaavat arvot neljällä miehellä olivat 36, 5 (vaihteluväli 34–40 vuotta), 6, 60 (5, 57−7, 64) mmol l−1 (255 (vaihteluväli 215–295) mg dl-1) kokonaiskolesteroli ja 94, 5 (vaihteluväli 84, 5-106, 8) kg.

tutkimuksessa oli neljä 1 viikon tutkimusvaihetta, joiden välillä oli 1 viikon elimistöstä poistumisjakso. Kussakin vaiheessa, joka annettiin satunnaistetun, yksisokkeisen, crossover—mallin mukaan, koehenkilöt nauttivat 250 ml sokeritonta gelatiinijälkiruokaa, joka sisälsi joko 5 g HPMC: tä (testivaiheet) tai ei HPMC: tä (lumelääkevaihe). Liivatejälkkäriä nautittiin aamiaisen, lounaan ja illallisen aikana yhteensä 15 g HPMC: tä päivässä kunkin testivaiheen aikana.

neljän vaiheen gelatiinijälkiruoan viskositeetit (mitattuna Yhdysvaltain farmakopean 2003 mukaan) olivat: lumelääkkeen gelatiini (0, 3 cP), keskiviskositeettinen HPMC (3915 CP), korkean viskositeetin HPMC (22 703 cP) ja erittäin korkean viskositeetin HPMC (63 030 CP). Kaikki HPMC-tuotteet (the Dow Chemical Company, Midland, MI, USA) olivat elintarvikekelpoisia ja noudattivat monografiaa Hypromelloosityyppi 2208 (United States Pharmacopeia, 2003).

ruoan saantia kontrolloitiin koko mekanismia koskevan tutkimuksen ajan sen varmistamiseksi, että ainoa ero ryhmien välillä ruokavaliossa oli HPMC: n esiintyminen tai puuttuminen. Tutkittavat söivät kaikki ateriat General Clinical Research Centerissä ja valitsivat tavallista ruokavaliotaan vastaavat ateriat. Tutkimusviikolla 1 kaikki kulutettu ruoka inventoitiin. Myöhemmissä vaiheissa toistettiin kulutettujen elintarvikkeiden tyypit ja määrät.

kunkin vaiheen 1.ja 8. päivänä yön yli kestäneen paaston jälkeen mitattiin paino, elintoiminnot ja seerumin lipidit. Elektrolyyttejä, maksan ja munuaisten toimintaa sekä veren morfologiaa mitattiin ensimmäisenä ja viimeisenä tutkimuspäivänä.

HPMC: n vaikutusta rasvan imeytymiseen tutkittiin mittaamalla ulosteen rasvapitoisuus. Lumelääkkeen ja erittäin korkean viskositeetin vaiheen aikana kaikki koehenkilöt suorittivat 72 tunnin ulostekokoelman päivinä 5, 6 ja 7.

pitkäaikaistutkimus

40 tutkittavasta 20 oli naisia, joiden keski-ikä oli 41, 6 (vaihteluväli 27, 3–55, 9) vuotta, seerumin kokonaiskolesterolin keskiarvo 5, 96 (vaihteluväli 5, 43–6, 48) mmol l−1 (230, 0 (vaihteluväli 209, 8–250, 2) mg dl−1), LDL-kolesterolin keskiarvo 4, 05 (vaihteluväli 3, 57–4, 53) mmol l 1 (156.4 (vaihteluväli 137, 9–174, 9) mg dl-1) ja keskimääräinen paino 75, 3 (vaihteluväli 59, 8–90, 8) kg. 20 miehen vastaavat arvot olivat 38, 3 (vaihteluväli 25, 9–50, 3) vuotta, 6, 05 (vaihteluväli 5, 46–6, 63) mmol l−1 (233, 4 (vaihteluväli 210, 9–255, 9) mg dl−1) kokonaiskolesteroli, 4, 26 (vaihteluväli 3, 74–4, 78) mmol l−1 (164, 4 (vaihteluväli 144, 4–184, 4) mg dl−1) LDL-kolesteroli ja 87,9 (vaihteluväli 75,7–101,1) kg paino.

kahta erittäin korkean viskositeetin HPMC−annosta (5 ja 15 g vuorokausi-1) verrattiin lumelääkkeeseen kolesterolia alentavan kyvyn määrittämiseksi lievästi hyperkolesteroleemisilla henkilöillä satunnaistetulla, kaksoissokkoutetulla, lumekontrolloidulla rinnakkaisvalmisteella. HPMC: tä annettiin kaakaojuomassa aamiaisen kanssa (5 ja 15 g päivä−1 hoitoryhmät) ja sokeri-melassikekseissä lounaan ja illallisen kanssa (15 g päivä−1 hoitoryhmä). Evästemuoto on yksityiskohtaisesti swidan et al. (1996).

koehenkilöiden lukumäärä kussakin hoitoryhmässä määritettiin teholaskelmilla, jotka perustuivat kahdella annoksella odotettuun kolesterolia alentavaan tehoon (arviolta ∼1% / g HPMC / vrk) ja aiemmin havaittuihin kokonaiskolesterolin variaatiokertoimiin. Vaikka teholaskelmat osoittivat, että viisi koehenkilöä riittäisi, 10 otettiin mukaan 15 g HPMC: tä päivässä-ryhmään ja 10 lumeryhmään, jotta voitiin ottaa huomioon HPMC: n alhaisempi nesteytys evästeissä ja tutkimuksen pituus. 5 g HPMC: tä päivässä-ryhmään otettiin kaksikymmentä koehenkilöä, koska kolesterolia alentavan vaikutuksen odotettiin jäävän vaatimattomammaksi.

tutkittavat eivät hyväksyneet 5 g HPMC: tä sisältävää kuumaa kaakaojuomaa, joka valitti heti äänekkäästi sen maittamattomuudesta ja uhkasi luopua tutkimuksesta viikon 1 lopussa. Tämän jälkeen kaikille koehenkilöille määrättiin 1 viikon elimistöstä poistoaika (viikko 2), ja viikosta 3 alkaen kaikki koehenkilöt saivat 5 g HPMC-evästemuotoa aamiaisella nautitun 5 g HPMC-kuumaa kaakaojuomaa sisältävän juoman sijasta. Koehenkilöt, jotka saivat lumelääkettä, vaihdettiin lumelääkekeksiin lumelääkkeen sijasta, jotta sokkoutuminen säilyisi. Sen jälkeen ei tullut valituksia maittavuudesta. Pitkän aikavälin tutkimuksen protokolla on esitetty taulukossa 1.

pitkäaikaistutkimus oli avohoitotutkimus, jossa koehenkilöt raportoivat päivittäin juomasekoituksestaan. (viikko 1), evästeet (viikot 1, 3-8) ja tarvittavat lomakkeet. Koehenkilöt söivät tavanomaiset ateriansa yhdessä tutkimusmuotoilujen kanssa. Ruoka-ja liikuntapäiväkirjat kirjattiin 1 viikkoa ennen tutkimusta sekä viikoilla 1, 4 ja 8. Testiformulaatioiden kulutuksen noudattamista arvioitiin päivittäin.

näytteiden analysointi ja kyselylomake

biokemialliset ja lipidimittaukset tehtiin Michiganin yliopiston sairaaloiden kliinisissä laboratorioissa käyttäen validoitua menetelmää, jossa kokonaiskolesterolin (TC) pitoisuus näytteessä vaihteli 1% ja vuorokausien välillä 2,2%. LDL – kolesteroli laskettiin TC -, high-density lipoprotein-kolesterolin (HDL-C) ja triglyseridien pitoisuuksista kaavalla:

Ulostekokoelmat analysoitiin Mayo Clinicissä (Rochester, MN, USA) käyttäen NMR-menetelmää, johon kuului mikroaaltokuivaus, minkä jälkeen jäljelle jääneiden protonien kiinteiden ja rasvaprosenttien estimointi signaalianalyysillä (Van de Kamer, 1958). Vakiomuotoiseen gravimetriseen menetelmään verrattuna kiintoaineprosentin ja rasvapitoisuuden arvot erosivat 2% ja 6%.

haittavaikutuksia koskevat kyselyt täytettiin molempien tutkimusten päivänä 1, mekanismia koskevan tutkimuksen kunkin vaiheen päivänä 7 ja pitkäaikaistutkimuksen viikoilla 1, 3 ja 6 päivänä 7. Koehenkilöt pisteyttivät päänsäryn, sydämentykytyksen, huimauksen, turvotuksen, ruoansulatuskanavan epämukavuuden, vatsakrampit, ripulin ja ilmavaivat seuraavasti: ei vaikutusta (0), lievä vaikutus (1=alle 30 min, 2=yli 30 min), kohtalainen vaikutus (3=alle 30 min, 4=yli 30 min) ja vaikea vaikutus (5=alle 30 min ja 6=yli 30 min). Koehenkilöille varattiin tilaa myös muiden haittavaikutusten kirjaamiseen.

suoliston liikkeitä ja johdonmukaisuutta raportoitiin lumelääkkeen ja erittäin korkean viskositeetin vaiheen 5, 6 ja 7 päivänä mekanismia koskevassa tutkimuksessa. Suolen johdonmukaisuus pisteytettiin seuraavasti: 1 (neste), 2 (löysä, pehmeä, hajanainen uloste), 3 (pehmeä mutta jatkuva uloste), 4 (kiinteä uloste) tai 5 (jäykkyydestä johtuva kulkuvaikeus).

tilastollinen analyysi

mekanismitutkimuksessa kaikki toimenpiteet ulosteen rasvaa lukuun ottamatta testattiin merkittävien erojen varalta toistuvilla varianssianalyyseillä (SuperAnova, helmitaulu Concepts, Berkeley, CA, USA) käyttäen tukeyn kompromissia jälkitestinä. Ulosteen rasvatiedot analysoitiin paritetulla t-testillä.

pitkäaikaistutkimuksessa aineistoa käsiteltiin univariatella (esimerkiksi oikaisematon univariate f-statistic) ja monimuuttujalla (esimerkiksi Wilks Lambda) toistetuilla varianssianalyyseillä käyttäen SAS-Tilastoanalyysipakettia (SAS Institute Inc., Cary, NC, Yhdysvallat). Nämä kaksi lähestymistapaa antoivat samanlaisia tuloksia. Analysoidut tekijät olivat viikko (tutkittavan sisällä) ja hoitoryhmä, sukupuoli ja ikä (tutkittavien välillä). Nollahypoteesit olivat, että viikko -, viikko-sukupuolen, viikko-iän tai viikko-ryhmäkohtaisia yhteisvaikutuksia ei ollut.

kaikkia eroja pidettiin merkittävinä 95 prosentin luottamustasolla.