a negatív festés fő célja a nehezen festhető baktériumsejtek morfológiai alakjának, méretének és elrendezésének tanulmányozása. Eg: Spirilla. Használható olyan sejtek festésére is, amelyek túl finomak ahhoz, hogy hőre rögzüljenek.

azt is használják, hogy készítsen biológiai minták elektronmikroszkópos. Vírusok, baktériumok, bakteriális flagella, biológiai membránszerkezetek és fehérjék vagy fehérje aggregátumok megtekintésére szolgál, amelyek mindegyike alacsony elektronszórási képességgel rendelkezik. Azt is használják a tanulmány és azonosítása vizes lipid aggregátumok, mint a lamellás liposzómák (le), fordított gömb alakú micellák (M) és fordított hatszögletű hii hengeres (H) fázisok negatív festési transzmissziós elektronmikroszkóppal.

A negatív festés elve

a negatív festéshez savas festék szükséges, például India tinta vagy Nigrozin.

India tinta vagy nigrozin savas folt. Ez azt jelenti, hogy a folt könnyen lead egy hidrogéniont (protont), és a festék kromofora negatív töltésűvé válik. Mivel a legtöbb baktériumsejt felülete negatív töltésű, a sejtfelület taszítja a foltot. A csúszda üvege elszíneződik, de a baktériumsejtek nem. A baktériumok tiszta foltokként jelennek meg sötét háttér előtt.

negatív festésű reagensek

India tinta

Nigrozin
Nigrozin 100 gm/L, formalin 5 ml/l vízben

negatív festési eljárás

1. Helyezzen egy nagyon kis cseppet (több mint egy hurok tele, kevesebb, mint egy szabadon eső csepp a csepegtetőből) nigrosin egy jól megtisztított és lángolt csúszda egyik vége közelében.

2. Távolítson el egy kis mennyiségű tenyészetet a ferdén egy oltó hurokkal, és szétszórja azt a foltcseppben anélkül, hogy a csepp elterjedne.

3. Használjon egy másik tiszta csúszdát a szervezetet tartalmazó foltcsepp eloszlatásához a következő technikával.

4. Helyezze a tiszta csúszda egyik végét a csúszda közepére a folttal. Döntse a tiszta csúszkát a csepp felé, éles szöget képezve, és húzza azt a csúszkát a csepp felé, amíg hozzá nem ér a csepphez, és a szórólap széle mentén elterjed. A tárgylemezek közötti kis hegyes szög fenntartása mellett tolja a szórólapot a festett tárgylemez tiszta vége felé, húzza a cseppet a szórólap mögé, és széles, egyenletes, vékony kenetet hozzon létre.

5. Hagyja a kenetet melegítés nélkül megszáradni.

6. Fókuszáljon egy vékony területet az olaj bemerítése alatt, és figyelje meg a szürke folt által körülvett festetlen sejteket.

eljárás a transzmissziós elektronmikroszkóp (TEM)

1. tartsa a bevont rács flim oldalával felfelé egy pár önbefogó csipesz.
2. készítsen 1: 1 keveréket a minta és a negatív folt (pl. 2% uranil-acetát vagy 2% nátrium-vagy kálium-foszfotungstate, pH 7,4). Add hozzá az 5cl-t a rácshoz. A kisebb részecskék gyorsabban adszorbeálódnak a rács felületéhez, mint a nagyobb részecskék.
   Alternatív megoldásként a fixálószerrel kevert minta hozzáadható a rácshoz a későbbi negatív festés előtt.
3. inkubáljuk 30-90 másodpercig, majd távolítsuk el a felesleges folyadékot egy
   darab szűrőpapír szakadt szélével.
4. levegőn szárítsa meg és vizsgálja meg a TEM-ben.

A negatív festés eredménye