Robertsonian transzlokációval rendelkező család: a speciáció lehetséges mechanizmusa emberekben
klinikai információk
egy 25 éves kínai férfi (IV-1) feleségül vett egy nem rokon nőt, normál kromoszómával (IV-2). Ennek a párnak volt egy fia (V-1), aki 6 hónapos korában boncolás nélkül halt meg. A korábbi kromoszóma-elemzés szerint A V-1-nek 45,XY,der(14;15)(q10;q10) kariotípusa volt. A propositus (IV-1) szülei fenotípusosan normális első unokatestvérek (III-1, III -2). A szülők, a kölcsönös nagybácsi és mindkét nagyszülők nem álltak rendelkezésre citogenetikai elemzés (ábra. 1). A mentális állapot vizsgálatát IV-1-en egy pszichiáter végezte.
kariotípus analízis
fluoreszcencia in situ hibridizáció (FISH)
a III-1 és IV-1 beteg spermium kromoszómáit FISH elemezte. A spermaminták mennyiségét, koncentrációját és mozgékonyságát az Egészségügyi Világszervezet kritériumai szerint értékelték. A spermaelemzés után a fokozatosan mozgó spermákat izoláltuk, és kétszer foszfátpufferolt sóoldatban (pH 7) mostuk.4), majd 1500 fordulat / perc sebességgel centrifugáljuk 11 percig. A pelleteket 5 ml ecetsav/metanol keverékkel (1:3) rögzítettük legalább 30 percig 4 KB C. A kapott magszuszpenzió Alikvotjait (40-50 KB) hideg előtisztított tárgylemezekre kenjük. A magok dekondenzációját 1 N NaOH-ban végeztük 2 percig. A diákat ezután Osztályozott etanol-sorozat bontotta le(70 %, 90 %, 100 %) denaturálva 0,25% formamiddal 2xssc-ben, majd egynapos hibridizációval a kereskedelemben kapható próbák kombinációjával. Ebben a vizsgálatban két szondakeveréket használtunk. A kétszínű halakat lokuszspecifikus szondák (LSP) és a Vysis (Vysis, Downers Grove, IL, USA) Tel-szondái segítségével végeztük. Az IV-1 és III-1 betegek esetében a 14Q TelVysion szondát (D14S1420,Spectrum Red) használták a 14q32.33 esetében, a 15Q TelVysion szondát(D15S120, Spectrum Green) pedig a 15q26.3 esetében.
az interkromoszomális hatás jelenlétének vizsgálatához hármas színű halakat végeztünk a második szondakeverékkel, amely a vysisből származó kereskedelmi műholdas (DNS) szondákból áll, beleértve a 18, X és Y kromoszómákat (CEP 18, Spectrum Blue/Cep X, Spectrum Green/Cep Y, Spectrum Red). A hibridizáció utáni mosások 2 percet tartalmaztak 0,4 xSSC/0,3% NP-40-ben (pH = 7) 72 CBC-n, majd 1 percet 2xssc/0,1% NP-40-ben (pH = 7) szobahőmérsékleten. A diákat dapi II (Vysis) borította. Csak a hasonló mértékű dekondenzációval és tiszta hibridizációs jelekkel rendelkező intakt spermatozoidokat értékelték. Az összes megszakadt vagy átfedő spermatozoidot kizárták az elemzésből. A 99% – os vagy annál nagyobb hibridizációs hatékonyságú diákat elemeztük. Betegenként 1000 spermamagot elemeztünk.
Array comparative genomic hybridization (aCGH)
Array comparative genomic hybridization (aCGH) került bevezetésre a klinikai diagnózisban, hogy gyorsan felismerje a genom egészére kiterjedő nyereségeket és veszteségeket nagyobb felbontással . Ez egy nagy áteresztőképességű módszer, amely észleli a másolatszám változásait akár 1 Kb-os felbontásra is. Az aCGH elemzéshez DNS-t extraháltunk a perifériás vérből . az aCGH analízist a 8 db 60 K Kereskedelmi tömb (Agilent Technologies, Santa Clara, Kalifornia, USA) alkalmazásával végeztük.
Adatelemzés
a statisztikai elemzést a SAS rendszer (2002-2003, SAS Institute Inc., Cary, NC). A meiotikus szegregáció elemzéséhez Chi-négyzet tesztet használtunk. A 0,05-nél kisebb valószínűségi értéket (P < 0,05) statisztikailag szignifikánsnak tekintették.
eredmények
a kariotípus analízist a család négy tagján végezték, és a Robertsonian transzlokáció két különböző kariotípusát mutatták ki. Az eredményeket az alábbiakban mutatjuk be. A III-1 és a III-2 heterozigóta, míg a IV-1 homozigóta volt.
III-1: 45,XY,der(14;15)(q10;q10)
III-2: 45,XX,der(14;15)(q10;q10)
IV-1: 44,XY,der(14;15)(q10;q10)
IV-2: 46, XX
mivel a betegnek(IV-1) apátia tünete van,pszichiáterhez utaltuk alapos mentális állapot vizsgálat céljából. A betegnek nem volt pszichiátriai kórtörténete, és együttműködő maradt a pszichiátriai interjú során. Gondolkodási folyamatai lineárisak, logikusak és következetesen célirányosak voltak, ítélőképessége sértetlen volt. Ezért nem figyeltek meg pszichiátriai tüneteket. Ezenkívül a neurológiai konzultáció nem tárt fel fokális neurológiai hiányokat. A craniocerebrális komputertomográfia (CT) és lumbálpunkció (LP) eredményei normálisak voltak. Az elektroencefalográfia (EEG) nem mutatott roham aktivitás jeleit.
az IV-1-en végzett aCGH-elemzés 2,03 Mb-os duplikációt észlelt a q11.1-q11.2 régióban a 15.kromoszómán (ábra. 3). A Másolásszám-variációs adatbázis (CNVdb) szerint ez a duplikáció kromoszómális polimorfizmus a normál populációban. Mivel a IV-1 egy homológ Robertsonian transzlokációs hordozó, és két származékos kromoszómája ugyanabból a Robertsonian transzlokációs hordozóból származik, feltételeztük, hogy a két származékos kromoszóma mindegyikének 2,03 Mb-os duplikációval kell rendelkeznie a q11.1-q11.2 régióban a 15.kromoszómán.