陰性染色の主な目的は、染色が困難な細菌細胞の形態学的形状、大きさおよび配置を研究することである。 例えば:スピリラ。 またそれが熱固定であるには余りにも敏感である細胞を汚すのに使用することができます。また、電子顕微鏡用の生物学的サンプルを調製するためにも使用される。
すべてに低い電子散乱力があるウイルス、細菌、細菌の鞭毛、生物的膜の構造および蛋白質または蛋白質の総計を見ることを使用します。 それはまた層状リポソーム(le)、逆にされた球形のミセル(M)および逆にされた六角形hiiの円柱(H)段階のような水様の脂質の総計の調査そして同一証明
陰性染色の原則
陰性染色には、インクやニグロシンなどの酸性染料が必要です。
インドのインクまたはNigrosinは酸性の汚れです。 これは、染色が容易に水素イオン(プロトン)を放棄し、染料の発色団が負に帯電することを意味する。 ほとんどの細菌細胞の表面は負に帯電しているので、細胞表面は汚れをはじく。 スライドのガラスは染色されますが、細菌細胞は染色されません。 細菌は暗い背景に対して明確な点として現れます。
陰性染色の試薬
インドインク
Nigrosin
Nigrosin100gm/L、ホルマリン5ml/l水中
陰性染色の手順
1。 よくきれいにされ、燃えたスライドの1つの端の近くにnigrosinの非常に小さい低下(ループ完全なより多く、点滴器からの自由な落下低下よりより少し)を置
2. 接種ループで傾斜から少量の培養物を除去し、滴を広げることなく汚れの滴に分散させる。/p>
3. 次の技術を使用して有機体を含んでいる汚れの低下を広げるのに別のきれいなスライドを使用しなさい。/p>
4. 汚れが付いているスライドの中心のきれいなスライドの1つの端を休ませて下さい。 きれいなスライドを鋭角を形作る低下の方に傾け、低下に触れ、拡散機のスライドの端に沿って広がるまで低下の方にそのスライドを引いて下さい。 スライド間の小さい鋭角を維持して、拡散機のスライドの後ろの低下を引張り、広く、薄い汚れを作り出す汚されるスライドのきれいな端の方に拡散機のスライドを押して下さい。
5. 塗抹標本を加熱せずに乾燥させる。
6. オイルの液浸の下で薄い区域を焦点を合わせ、灰色の汚れによって囲まれる染色されていない細胞を観察して下さい。
透過型電子顕微鏡(TEM)で表示する手順
- 自己クランプ鉗子のペアでコーティングされたグリッドflim側を保持します。
- サンプルと陰性染色の1:1の混合物を作る(例えば。 2%のウラニルのアセテートか2%のナトリウムまたはカリウムのph7.4)。 グリッドに5μ lを追加します。 より小さな粒子は、より大きな粒子よりも迅速にグリッド表面に吸着する。
あるいは、固定剤と混合されたサンプルは、その後の陰性染色の前にグリッドに添加することができる。 - 30-90秒間インキュベートし、濾紙の引き裂かれた端で余分な液体を除去する。
- 空気乾燥し、TEMで調べます。li>