臨床情報

25歳の中国人男性(IV-1)は、正常な染色体(IV-2)を持つ非同族女性と結婚した。 この夫婦には息子（V-1）がいましたが、剖検なしで生後6ヶ月で死亡しました。 以前の染色体分析は、V-1は45、XY、der（14;15）（q10;q10）核型を持っていたことを示した。 Propositus(IV-1)の親は表現型的に正常な最初のいとこ(III-1,III-2)です。 彼らの両親、相互の叔父、および両方の祖父母は、細胞遺伝学的分析には利用できなかった（図１ ０Ａ）。 1). 精神状態検査は、精神科医によってIV-1に行われました。

核型分析

蛍光in situハイブリダイゼーション（FISH）

患者III-1およびIV-1からの精子染色体をFISHによって分析した。 精液サンプルは、世界保健機関の基準に従って、体積、濃度および運動性について評価した。 精液分析の後、漸進的に移動性の精子を単離し、リン酸緩衝生理食塩水（pH7.5）中で2回洗浄した。４）を１ ５ ０ ０ｒｐｍで１ １分間遠心分離した。 ペレットを、５ｍｌの酢酸／メタノール混合物（１：３）で４℃で少なくとも３ ０分間固定した。 核脱縮を１Ｎ Ｎａｏｈ中で２分間行った。 その後、スライドは段階的なエタノール系列によって分解された(70 %, 90 %, 100 %) そして、0.25％ホルムアミドで変性し、2xsscに続いて市販のプローブの組み合わせで一晩ハイブリダイゼーションを行った。 この研究では二組のプローブ混合物を用いた。 Ｖｙｓｉｓ（Ｖｙｓｉｓ，Ｄｏｗｎｅｒｓ Ｇｒｏｖｅ，ＩＬ，ＵＳＡ）からのｌｏｃｕｓｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｏｂｅｓ（ＬＳＰ）およびＴｅｌ ｐｒｏｂｅｓを使用して、二色魚を実施した。 患者IV-1およびIII-1では、TelVysionプローブ14q（D14S1420、スペクトルレッド）を14q32.33に使用し、TelVysionプローブ15q（D15S120、スペクトルグリーン）を15q26.3に使用した。

染色体間効果の存在を調べるために、三重色の魚は、染色体18、XおよびY（CEP18、Spectrum Blue/CEP X、Spectrum Green/CEP Y、Spectrum Red）を含むVysisからの商業衛星（DNA）プローブからなる第二のプロー ハイブリダイゼーション後の洗浄には、72℃で0.4xSSC/0.3%NP-40(pH=7)中に2分、室温で2xSSC/0.1%NP-40(pH=7)中に1分が含まれた。 スライドはＤＡＰＩ Ｉ Ｉ（Ｖｙｓｉｓ）で覆われた。 同様の程度の脱凝縮および明確なハイブリダイゼーションシグナルを有する無傷の精子のみが得点された。 すべての破壊された精子または重複した精子を分析から除外した。 ハイブリダイゼーション効率99％以上のスライドを分析した。 患者あたり1,000精子核を分析した。

Array comparative genomic hybridization(aCGH)

Array comparative genomic hybridization(aCGH)は、より高い分解能でゲノム全体の損益を迅速に検出するために臨床診断に導入されています。 1Kb低いの決断へのコピー数変更を検出するのは高い効率方法である。 Ａｃｇｈ分析のために，末梢血からＤＮＡを抽出した。 ８×６ ０Ｋ市販アレイ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，Ｃ Ａ，ＵＳＡ）を用いてＡＣＧＨ分析を行った。

データ分析

統計分析は、SASシステム（2002-2003、SAS Institute Inc.）を使用して行った。、Cary、NC）。 カイ二乗検定を減数分裂分離分析に用いた。 0.05未満の確率値(P<0.05)は統計的に有意であると考えられました。

結果

核型分析は、家族の四つのメンバーに対して行われ、Robertsonian転座の二つの異なる核型を検出しました。 その結果を以下に示す。 III-1とIII-2はヘテロ接合であったが、IV-1はホモ接合であった。/p>

• III-1: 45,XY,der(14;15)(q10;q10)

• III-2:45,XX,der(14;15)(q10;q10)

• IV-1:44,XY,der(14;15)(q10;q10)

• III-2:45,XX,der(14;15)(q10;q10)

• IV-1:44,XY,der(14;15)(q10;q10)

• IV-1:44,XY,der(14;15)(q10;q10)

• li>

• iv-2:46,xx

患者（iv-1）は無関心の症状を持っているので、私たちは徹底的な精神状態の検査のために精神科医に相談しました。 患者は精神医学の歴史を持たず、精神医学のインタビューの間に協力的なままであった。 彼の思考プロセスは線形、論理的、一貫して目的指示され、彼の判断はそのままだった。 したがって、精神症状は観察されなかった。 さらに、神経学的相談は、焦点神経学的欠損を明らかにしなかった。 頭蓋脳コンピュータ断層撮影（Ｃ ｔ）と腰椎穿刺（Ｌ ｐ）の結果は正常であった。 脳波検査（ＥＥＧ）では発作活動の徴候は認められなかった。IV-1のaCGH解析では、15番染色体上のq11.1-q11.2の領域で2.03Mbの重複が検出された（図。 3). コピー数変異データベース（CNVdb）によれば、この重複は正常集団における染色体多型である。 IV-1は相同Robertsonian転座キャリアであり、彼の二つの誘導体染色体は同じRobertsonian転座キャリアから来たので、我々は二つの誘導体染色体のそれぞれが2.03Mbの重複q11.1-q11.2染色体15上の領域にあるべきであると推測した。

III-1およびIV-1の精子を分析するために、二つの異なるRobertsonian転座キャリア（III-1およびIV-1）からの精液サンプルを世界保健機関の基準に従って体積、濃度および運動性について評価した。 III-1における精子の量、濃度および移動性は、彼の老齢のために有意に減少する。 対照的に、それらはすべてIV-1で正常である（表1）。 さらに，これら二つの異なるロバートソニアン転座キャリアにおける減数分裂分離パターンを解析した。 ヘテロ接合体Robertsonian転座キャリア（III-1）では、交互分離に起因する正常/バランスのとれた精子の頻度は79.9％であったが、隣接分離に起因する不均衡な精子の頻度は20.1％であり、これは正常集団よりも有意に高い（表2）。 対照的に、ホモ接合体Robertsonian転座（IV-1）では、平衡精子の頻度は99.7％であったが、不平衡精子の頻度はわずか0.3％であり、これは正常な集団と同様である（表2）。 これらのデータは、ヘテロ接合体のそれらが不均衡の割合を持っていたが、ロバートソニアン転座ホモ接合体のほぼすべての精子がバランスが取れてい さらに、IV-1の精子の染色体分析は、22、X、der（14;15）核型または22、Y、der（14;15）核型のいずれかを示した私たちの推測をサポートしています。 図に示すように。 図4に示すように、矢印は、この精子がder（14;15）の二つの誘導体染色体を有することを示唆する四つの蛍光シグナル（二つの赤と二つの緑）を有する精子を指 これらのデータは、Robertsonian転座を介してヒトにおける種分化の潜在的なメカニズムを示唆している。

他の染色体のシナプスおよび分離に対する転座染色体の影響は、染色体間効果（ICE）と呼ばれ 氷が存在するかどうかを決定するために、18番染色体、XおよびYのヌリソミー、ジソミーおよび二倍体率を、両方のRobertsonian転座キャリアにおいて分析した（表3）。 ヘテロ接合体Robertsonian転座キャリア（III-1）では、性染色体異数性および二倍体の速度の有意な増加があった。 対照的に、ホモ接合体Robertsonian転座（IV-1）では、性染色体のヌリソミー、ディスソミーおよび二倍体を有する精子の発生率は、正常な集団と同様のままであった（表3）。 このデータは，ＩＣＥは特定のロバートソニアン転座キャリアにのみ存在することを示唆している。

議論

Rob転座キャリーは、短腕材料のみの損失を伴うため、表現型的に正常である。 異なる種の自然集団における多くのそのような再配置が知られている。 Robertsonian転位は、種の多型を増加させ、自然選択のための材料を提供し、種分化につながることさえできます。 多型または固定永久ヘテロ接合体として生じる染色体再配列のタイプは、常にメタまたはサブメタセントリック染色体を含むと主張されている。 種を区別し、これらの種を単離するのに役立つものは、自己滅菌されているtelocentricまたはacrocentric染色体を含む。 我々の研究では、相同Robertsonian転座キャリアであるIV-1は、健康であり、バランスのとれた染色体補体を持っていた。 からの精液サンプルの評価は正常な精子の形態および運動性を示した。 さらに重要なことは、99。彼の精子の7％は正常またはバランスが取れており（表2）、染色体間効果はなかった（表3）。

decondensed精液の核の多色刷りの魚は正常な/釣り合った精液の厳密な量で情報を提供する転座キャリアの精液の減数分裂の急速な分析を可能にします。 このような情報は、基本的な細胞遺伝学的研究だけでなく、Robertsonian転座キャリアの生殖カウンセリングにも重要であることは間違いない。 t(14;15)はまれなロバートソン転座である。 我々のデータは、代替分離がRobertsonian転座キャリアの隣接分離よりも頻繁にあったことを示す以前の研究を確認しました。 しかし、2つのRobertsonian転座キャリアにおける減数分裂の分離パターンと染色体間効果は異なっている（表2）。 これらの知見は、以前に公開されたデータと一致しています。 代替分離の高い有病率はおそらく減数分裂中の三価のシス配置によるものであり、これはすべてのロバートソン転座における代替分離を支持する。 Robertsonian転座キャリアは完全な遺伝的補体を持っていますが、遺伝的に不均衡な配偶子の確率が高いため、その生産的適応度は低下します。

染色体間効果は、転座に関与する染色体と他の染色体を含む可能性のある性小胞との間のヘテロシナプスの形成によって説明することができ 氷は文献で物議を醸している。 いくつかの出版物は、他の人がこの現象の証拠を示さなかったが、ロバートソニアン転座とその存在を示しています。 我々の研究では、ヘテロ接合体Robertsonian転座で精子の性染色体の異数性の高い発生率を観察したが、ホモ接合体Robertsonian転座ではなく、ICEが唯一のいくつかのRobertsonian転座キャリア

Robertsonian再配列は、特に多くのRobertsonian metacentric染色体がmonobrachial相同性を示す場合、核型的に類似した集団間の迅速かつ効率的な生殖分離につながる可能性のある一般的な染色体 ホモ接合ロバートソン転座はいくつかのグループによって報告され、オニールグループによって体系的にレビューされている。 ダラピッコラ他 二つのt（14;21）染色体を持つ胎児を報告しました。 関連する親は同じ転座に対してヘテロ接合であった。 マルティネス他 tのためのホモ接合三大人の兄弟を報告しました(13;14). 彼らの両親は最初のいとこであり、両方ともヘテロ接合体のキャリアであった。 Rajangam et al. ユニークなDS核型45、XY、der(14;21)pat、der(14;21)mat、+21matを発見しました。 転座ヘテロ接合性は減数分裂障害と関連しているが、これは不妊症および亜繁殖性につながるが、減数分裂には影響しないはずである。 ここでは、44、XY、der(14;15)(q10;q10)、der(14;15)(q10;q10)核型を持つ男を報告しました。 Robertsonian translocationは進化のための材料を提供する可能性があります。 特定のRobertsonian転座染色体のホモ接合である個人のグループの長期単離は理論的に44の染色体で完全な遺伝的補体を持つ新しい人間の亜種の確立につな 種間の核型の違いは長い間認識されてきたが、これらの突然変異が種分化において因果的な役割を果たすかどうかの問題は未解決のままである。 ヘテロ接合体のそれらは種分化のためのRobertsonian転座のホモ接合性の可能性を示唆する不均衡なものの割合を持っていたが、我々の研究では、Robertsonian転座ホモ接合体のすべての精子はバランスが取れていた。