o principal objectivo da coloração negativa é estudar a forma morfológica, tamanho e disposição das células bacterianas que é difícil de manchar. eg: Spirilla. Também pode ser usado para manchar células que são muito delicadas para ser fixado pelo calor.

também é usado para preparar amostras biológicas para microscopia eletrônica. É usado para ver vírus, bactérias, flagelos bacterianos, estruturas biológicas de membrana e proteínas ou agregados de proteínas, que todos têm um baixo poder de dispersão de elétrons. Também é usado para o estudo e identificação de agregados lipídicos aquosos como lipossomas lamelares (le), micelas esféricas invertidas (M) e fases cilíndricas hexagonais hii invertidas (H) por microscopia eletrônica de transmissão de coloração negativa.

princípio da coloração negativa

coloração negativa requer um corante ácido, como tinta da Índia ou Nigrosina.tinta da Índia ou Nigrosina é uma mancha ácida. Isto significa que a mancha prontamente dá um íon de hidrogênio (próton) e o cromóforo do corante torna-se negativamente carregado. Uma vez que a superfície da maioria das células bacterianas está negativamente carregada, a superfície celular repele a mancha. O vidro do Escorrega vai manchar, mas as células bacterianas não. As bactérias vão aparecer como pontos claros contra um fundo escuro.reagentes de coloração negativa tinta da Índia Nigrosina Nigrosina 100 gm/L, formalina 5 ml / L em água procedimento de coloração negativa Colocar uma gota muito pequena (mais do que um loop cheio, menos do que uma gota de queda livre do conta-gotas) de nigrosin perto de uma extremidade de um slide bem limpo e flamejante.2. Remover uma pequena quantidade da cultura da inclinação com um ciclo de inoculação e dispersá-la na gota de mancha sem espalhar a gota.

3. Use outra lâmina limpa para espalhar a gota de mancha que contém o organismo usando a seguinte técnica.

4. Coloque uma extremidade do Escorrega limpo no centro do Escorrega com a mancha. Inclinar o deslizamento limpo em direção à gota formando um ângulo agudo e desenhar que desliza em direção à gota até que ela toque a gota e faz com que ela se espalhe ao longo da borda do deslizamento do afastador. Mantendo um pequeno ângulo agudo entre os diapositivos, empurre o afastador para a extremidade limpa do diapositivo a ser manchada arrastando a gota por trás do diapositivo e produzindo uma mancha larga, mesmo, fina.

5. Deixar secar a mancha sem aquecimento.

6. Concentre uma área fina sob imersão em óleo e observe as células não manchadas rodeadas pela mancha cinzenta.

procedimento para ver no microscópio electrónico de transmissão (met)

1. manter uma grade revestida flim para cima num par de fórceps self-clamping.
2. fazer uma mistura 1:1 de amostra e mancha negativa (por exemplo. 2% acetato de uranilo ou 2% fosfotungstato de sódio ou potássio, pH 7.4). Adicionar 5µl à grelha. Partículas menores adsorvem à superfície da grelha mais rapidamente do que partículas maiores.alternativamente, a amostra misturada com fixativo pode ser adicionada à grade antes da coloração negativa subsequente. incubar por 30-90 segundos e remover o excesso de líquido com a borda rasgada de um pedaço de papel de filtro.secar Ao ar e examinar no MET.

Resultados Negativos de Coloração