de informações Clínicas
Um jovem de 25 anos, homem Chinês (IV-1), casado com um não-consangüíneos mulher normal de cromossomos (IV-2). Este casal teve um filho (V-1) que morreu aos 6 meses de idade sem uma autópsia. A análise cromossómica anterior indicou que o v-1 tinha um cariótipo 45,XY,der(14;15)(q10;q10). Os pais do propositus (IV-1) são fenotipicamente primos em primeiro grau (III-1, III-2). Seus pais, um tio mútuo e ambos os avós não estavam disponíveis para análise citogenética(Fig. 1). O exame de estado Mental foi realizado em IV – 1 por um psiquiatra.a análise do cariótipo
fluorescência em hibridização in situ (FISH)
fluorescência em hibridização in situ (FISH)
os cromossomas do esperma do doente III-1 e IV-1 foram analisados por peixes. As amostras de sémen foram avaliadas quanto ao volume, concentração e motilidade de acordo com os critérios da Organização Mundial de saúde. Após a análise do sémen, o esperma progressivamente móvel foi isolado e lavado duas vezes em tampão fosfato salino (pH 7.4) e centrifugado a 1500 rpm durante 11 minutos. Os Pellets foram fixados com 5 ml de ácido acético/mistura de metanol (1:3) durante, pelo menos, 30 minutos a 4 °C. as alíquotas (40-50 µl) da suspensão resultante dos núcleos foram manchadas em lâminas pré-limpas a frio. A decondensação dos núcleos foi realizada em 1 N NaOH durante 2 minutos. As lâminas foram então degradadas por uma série de etanol graduado (70 %, 90 %, 100 %) e desnaturado com 0,25% de formamida em 2xSSC, seguido de hibridização nocturna com uma combinação de sondas comercialmente disponíveis. Neste estudo foram utilizados dois conjuntos de misturas de sonda. O peixe de cor dupla foi realizado utilizando sondas locusspecific (LSP) e sondas Tel de Vysis (Vysis, Downers Grove, IL, USA). Para o paciente IV – 1 e III-1, A sonda de telvisão 14q (D14S1420, Spectrum Red) foi usada para 14q32.33 e a sonda de telvisão 15q(D15S120, Spectrum Green) foi usada para 15q26.3.
para investigar a presença de efeito de Intercâmbio, FISH de cor Tripla foi realizado usando a segunda mistura de sonda, que consiste em sondas de satélite comercial (DNA) de Vise, incluindo cromossomas 18, X e Y (CEP 18, Spectrum Blue/CEP X, Spectrum Green/CEP Y, Spectrum Red). As lavagens pós-hibridação incluíram 2 min em 0.4 xSSC / 0.3%NP-40 (pH = 7) a 72 °C, seguido de 1 min em 2xSSC/0.1% NP-40 (pH = 7) à temperatura ambiente. Os diapositivos foram cobertos com DAPI II (Vysis). Apenas espermatozóides intactos com um grau semelhante de descondensação e sinais claros de hibridação foram marcados. Todos os espermatozóides perturbados ou sobrepostos foram excluídos da análise. Slides com eficiência de hibridação de 99% e mais foram analisados. 1000 núcleos de esperma foram analisados por paciente.
a hibridização genómica comparativa (CGH)
a hibridização genómica comparativa (CGH) foi introduzida no diagnóstico clínico para detectar rapidamente ganhos e perdas genomewide com maior resolução . É um método de alta produção que detecta mudanças de número de cópias em uma resolução de até mesmo tão baixo quanto 1 Kb. Para a análise do aCGH, o ADN foi extraído do sangue periférico . a análise do aCGH foi realizada utilizando os arrays comerciais de 8 × 60 K (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, EUA).
Análise de dados
a análise estatística foi realizada utilizando o sistema SAS (2002-2003, SAS Institute Inc., Cary, NC). O teste Chi-quadrado foi usado para análise de segregação meiótica. Um valor de probabilidade inferior a 0,05 (P < 0,05) foi considerado estatisticamente significativo.resultados
a análise do cariótipo foi realizada em quatro membros da família e detectou dois cariótipos diferentes da translocação Robertsoniana. Os resultados são mostrados abaixo. O III – 1 e o III-2 eram heterozigóticos enquanto o IV-1 era homozigótico.
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III-1: 45,XY,der(14;15)(q10;q10)
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III-2: 45,XX,der(14;15)(q10;q10)
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IV-1: 44,XY,der(14;15)(q10;q10), der(14;15)(q10;q10)
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IV-2: 46,XX
Porque o paciente (IV-1) tem um sintoma de apatia, nos referimos a ele para ver um psiquiatra, um minucioso exame do estado mental. O paciente não tinha histórico psiquiátrico e permaneceu cooperativo durante a entrevista psiquiátrica. Seus processos de pensamento eram lineares, lógicos e consistentemente direcionados e seu julgamento estava intacto. Consequentemente, não foram observados sintomas psiquiátricos. Além disso, a consulta de Neurologia não revelou défices neurológicos focais. Os resultados da Tomografia Computadorizada Craniocerebral (CT) e da punção lombar (LP) foram normais. A electroencefalografia (EEG) não mostrou sinais de actividade convulsiva.
a análise do aCGH no IV – 1 detectou uma duplicação de 2,03 Mb na região do Q11.1-q11.2 no cromossoma 15 (Fig. 3). De acordo com o Copy number variation database (CNVdb), esta duplicação é um polimorfismo cromossômico na população normal. Como IV-1 é um portador de translocação Robertsoniana homólogo e seus dois cromossomos derivados vieram do mesmo portador de translocação Robertsoniana, especulou-se que cada um dos dois cromossomos derivados deve ter uma duplicação de 2,03 Mb na região de q11.1-q11.2 no cromossomo 15.
aCGH analysis of IV-1 revealed a 2.03 Mb duplication at chromosome 15 q11.1-q11.2 (arr 15q11.1q11.2(20,481,702-22,509,254)x4)
A análise do esperma de III-1 IV-1, em amostras de sêmen de dois diferentes translocação Robertsoneana operadoras (III-1 IV-1) foram avaliados quanto ao volume, a concentração e a motilidade de acordo com a Organização Mundial de Saúde critérios. O volume, concentração e mobilidade do esperma no III-1 são significativamente reduzidos devido à sua velhice. Em contrapartida, são todos normais no IV – 1 (Quadro 1). Analisámos os padrões de segregação meiótica nestes dois portadores de translocação Robertsonianos. No heterozigoto portador de translocação Robertsoneana (III-1), a freqüência de normal/equilibrada espermatozóides resultante da alternativa a segregação era de 79,9 %, enquanto a frequência de um desequilíbrio de espermatozóides, resultando adjacentes a segregação foi de 20,1 %, o que é significativamente maior do que a população normal (Tabela 2). Em contraste, na translocação homozigótica Robertsoniana (IV-1), a frequência de espermatozóides equilibrados foi de 99,7%, enquanto a frequência de espermatozóides desequilibrados foi de apenas 0,3%, o que é semelhante às populações Normais (Tabela 2). Estes dados demonstraram que quase todos os espermatozóides de homozigotos de translocação Robertsoniana estavam equilibrados enquanto os de heterozigotos tinham uma porcentagem de desequilibrados. Além disso,a análise cromossômica do esperma do IV-1 mostrou um cariótipo 22,X,der (14;15) ou 22,Y, der(14;15) apoiando nossa especulação. Como mostrado na Fig. 4, a seta apontou um esperma com quatro sinais de fluorescência(dois vermelhos e dois verdes) sugerindo que este esperma tem dois cromossomos derivados de der (14;15). Estes dados sugerem um mecanismo potencial de especiação em humanos através da translocação Robertsoniana.
espermatozóides após hibridação com telvisão 14q32.33 (vermelho espectro) e telvisão 15q26.3 (Verde espectro). O espermatozóide com seta vermelha pode ser um espermatozóide diplóide
a influência dos cromossomas translocados nas sinapses e disjunção de outros cromossomas é chamada de efeito intercromossomal (ICE) . Para determinar se o gelo estava presente, as taxas de nullisomia, disomia e diplóides para os cromossomas 18, X e Y foram analisadas em ambos os portadores de translocação Robertsoniana (Tabela 3). No portador de translocação heterozigota Robertsonian (III-1), houve um aumento significativo na taxa de aneuploidia e diplóide do cromossomo sexual. Em contraste, na translocação homozigótica Robertsoniana (IV-1), a incidência de espermatozóides com nullisomia, disomia e diplóide para os cromossomas sexuais permaneceu semelhante às populações Normais (Tabela 3) . Estes dados sugerem que o gelo só se apresenta em certos Portadores de translocação Robertsonian.
Discussão
Roubar translocação carrega são fenotipicamente normal, já que eles envolvem a perda apenas do braço curto do material. Muitos desses rearranjos em populações naturais de diferentes espécies são conhecidos. Os rearranjos robertsonianos podem aumentar os polimorfismos em uma espécie, fornecer material para seleção natural e até mesmo levar à especiação . It has been argued that the types of chromosome rearrangments that occur as polymorphisms or as fixed permanent heterozygotes invariably involve meta-or submetacentric chromosomes. Aqueles que distinguem espécies e servem para isolar estas espécies envolvem cromossomas telecêntricos ou acrocêntricos, que são auto-esterilizantes . No nosso estudo, o IV-1, que é um portador de translocação Robertsoniana homólogo, era saudável e tinha um complemento cromossómico equilibrado. A avaliação de uma amostra de sémen mostrou morfologia e motilidade espermatozóides normais. Mais importante, 99.7 % de seus espermatozóides são normais ou equilibrados (Tabela 2) e não houve efeito de Intercâmbio (Tabela 3).
peixes Multicolor em núcleos de espermatozóides descondensados permite uma rápida análise da segregação meiótica no esperma de portadores de translocação, fornecendo informações sobre a quantidade exata de espermatozóides normais/equilibrados . Tais informações são, sem dúvida, importantes não só para pesquisa citogenética básica, mas também para aconselhamento reprodutivo de portadores de translocação Robertsoniana. t (14;15) são translocações Robertsonianas raras. Os nossos dados confirmaram estudos anteriores mostrando que a segregação alternativa era mais frequente do que as segregações adjacentes em portadores de translocações Robertsonianas . No entanto, os padrões de segregação meiótica e os efeitos inter-relacionados em dois portadores de translocação Robertsonianos são diferentes (Tabela 2). Estes resultados são consistentes com os dados previamente publicados . A alta prevalência da segregação alternativa é presumivelmente devido à configuração cis do trivalente durante a meiose, o que favorece uma segregação alternativa em todas as translocações Robertsonianas . Embora um portador de translocação Robertsoniano tenha um complemento genético completo, sua aptidão produtiva é reduzida devido à alta probabilidade de gâmetas geneticamente desequilibrados.
o efeito da transferência pode ser explicado pela formação de heterossinapses entre os cromossomas envolvidos na translocação e na vesícula sexual, o que também pode envolver outros cromossomas . O gelo permanece controverso na literatura. Algumas publicações indicaram a sua presença com a translocação Robertsoniana, enquanto outras não demonstraram qualquer evidência deste fenómeno . Em nosso estudo, observou-se maior incidência de aneuploidy para os cromossomas sexuais em espermatozóides no heterozigoto translocação Robertsoneana mas não o homozigoto translocação Robertsoneana sugerindo que o GELO só apresenta em alguns translocação Robertsoneana operadoras.
Robertsoneana rearranjos são comuns alterações cromossômicas que podem levar a um rápido e eficiente isolamento reprodutivo entre karyotypically populações semelhantes, especialmente quando muitos Robertsoneana metacentric cromossomos apresentar monobrachial homologias . Translocações Homozigóticas Robertsonianas têm sido relatadas por vários grupos e sistemicamente revisadas pelo Grupo O’Neill . Dallapiccola et al. relatou um feto com dois cromossomas t (14;21). Os pais relacionados eram heterozigóticos para a mesma translocação. Martinez et al. relatou três irmãos adultos homozigóticos para t (13;14). Seus pais eram primos em primeiro grau e ambos eram portadores heterozigóticos. Rajangam et al. found a unique DS karyotype 45, XY, der(14;21)pat, der (14;21)mat, +21mat. Embora a heterozigosidade da translocação esteja associada a perturbações meióticas, o que levará à infertilidade e subfecundidade, ela não deve ter qualquer efeito sobre a meiose. Aqui relatamos um homem com um cariótipo 44,XY,der(14;15)(q10;q10),der(14;15)(q10;q10). A translocação robertsoniana pode fornecer material para a evolução. O isolamento a longo prazo de um grupo de indivíduos que são homozigóticos para um cromossoma específico de translocação Robertsoniana poderia teoricamente levar ao estabelecimento de uma nova subespécie humana com um complemento genético completo em 44 cromossomas. Embora as diferenças kariotípicas entre as espécies tenham sido reconhecidas há muito tempo, a questão de se estas mutações desempenham um papel causal na especiação permanece sem resposta . Em nosso estudo, todos os espermatozóides de homozigotos de translocação Robertsonianos foram equilibrados enquanto os de heterozigotos tinham uma porcentagem de desequilibrados implicando de um potencial da homozigosidade das translocações Robertsonianas para a especiação.