Uma família com translocação Robertsoneana: um potencial mecanismo de especiação em seres humanos
de informações Clínicas
Um jovem de 25 anos, homem Chinês (IV-1), casado com um não-consangüíneos mulher normal de cromossomos (IV-2). Este casal teve um filho (V-1) que morreu aos 6 meses de idade sem uma autópsia. A análise cromossómica anterior indicou que o v-1 tinha um cariótipo 45,XY,der(14;15)(q10;q10). Os pais do propositus (IV-1) são fenotipicamente primos em primeiro grau (III-1, III-2). Seus pais, um tio mútuo e ambos os avós não estavam disponíveis para análise citogenética(Fig. 1). O exame de estado Mental foi realizado em IV – 1 por um psiquiatra.a análise do cariótipo
fluorescência em hibridização in situ (FISH)
os cromossomas do esperma do doente III-1 e IV-1 foram analisados por peixes. As amostras de sémen foram avaliadas quanto ao volume, concentração e motilidade de acordo com os critérios da Organização Mundial de saúde. Após a análise do sémen, o esperma progressivamente móvel foi isolado e lavado duas vezes em tampão fosfato salino (pH 7.4) e centrifugado a 1500 rpm durante 11 minutos. Os Pellets foram fixados com 5 ml de ácido acético/mistura de metanol (1:3) durante, pelo menos, 30 minutos a 4 °C. as alíquotas (40-50 µl) da suspensão resultante dos núcleos foram manchadas em lâminas pré-limpas a frio. A decondensação dos núcleos foi realizada em 1 N NaOH durante 2 minutos. As lâminas foram então degradadas por uma série de etanol graduado (70 %, 90 %, 100 %) e desnaturado com 0,25% de formamida em 2xSSC, seguido de hibridização nocturna com uma combinação de sondas comercialmente disponíveis. Neste estudo foram utilizados dois conjuntos de misturas de sonda. O peixe de cor dupla foi realizado utilizando sondas locusspecific (LSP) e sondas Tel de Vysis (Vysis, Downers Grove, IL, USA). Para o paciente IV – 1 e III-1, A sonda de telvisão 14q (D14S1420, Spectrum Red) foi usada para 14q32.33 e a sonda de telvisão 15q(D15S120, Spectrum Green) foi usada para 15q26.3.
para investigar a presença de efeito de Intercâmbio, FISH de cor Tripla foi realizado usando a segunda mistura de sonda, que consiste em sondas de satélite comercial (DNA) de Vise, incluindo cromossomas 18, X e Y (CEP 18, Spectrum Blue/CEP X, Spectrum Green/CEP Y, Spectrum Red). As lavagens pós-hibridação incluíram 2 min em 0.4 xSSC / 0.3%NP-40 (pH = 7) a 72 °C, seguido de 1 min em 2xSSC/0.1% NP-40 (pH = 7) à temperatura ambiente. Os diapositivos foram cobertos com DAPI II (Vysis). Apenas espermatozóides intactos com um grau semelhante de descondensação e sinais claros de hibridação foram marcados. Todos os espermatozóides perturbados ou sobrepostos foram excluídos da análise. Slides com eficiência de hibridação de 99% e mais foram analisados. 1000 núcleos de esperma foram analisados por paciente.
a hibridização genómica comparativa (CGH)
a hibridização genómica comparativa (CGH) foi introduzida no diagnóstico clínico para detectar rapidamente ganhos e perdas genomewide com maior resolução . É um método de alta produção que detecta mudanças de número de cópias em uma resolução de até mesmo tão baixo quanto 1 Kb. Para a análise do aCGH, o ADN foi extraído do sangue periférico . a análise do aCGH foi realizada utilizando os arrays comerciais de 8 × 60 K (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, EUA).
Análise de dados
a análise estatística foi realizada utilizando o sistema SAS (2002-2003, SAS Institute Inc., Cary, NC). O teste Chi-quadrado foi usado para análise de segregação meiótica. Um valor de probabilidade inferior a 0,05 (P < 0,05) foi considerado estatisticamente significativo.resultados
a análise do cariótipo foi realizada em quatro membros da família e detectou dois cariótipos diferentes da translocação Robertsoniana. Os resultados são mostrados abaixo. O III – 1 e o III-2 eram heterozigóticos enquanto o IV-1 era homozigótico.
Porque o paciente (IV-1) tem um sintoma de apatia, nos referimos a ele para ver um psiquiatra, um minucioso exame do estado mental. O paciente não tinha histórico psiquiátrico e permaneceu cooperativo durante a entrevista psiquiátrica. Seus processos de pensamento eram lineares, lógicos e consistentemente direcionados e seu julgamento estava intacto. Consequentemente, não foram observados sintomas psiquiátricos. Além disso, a consulta de Neurologia não revelou défices neurológicos focais. Os resultados da Tomografia Computadorizada Craniocerebral (CT) e da punção lombar (LP) foram normais. A electroencefalografia (EEG) não mostrou sinais de actividade convulsiva.
a análise do aCGH no IV – 1 detectou uma duplicação de 2,03 Mb na região do Q11.1-q11.2 no cromossoma 15 (Fig. 3). De acordo com o Copy number variation database (CNVdb), esta duplicação é um polimorfismo cromossômico na população normal. Como IV-1 é um portador de translocação Robertsoniana homólogo e seus dois cromossomos derivados vieram do mesmo portador de translocação Robertsoniana, especulou-se que cada um dos dois cromossomos derivados deve ter uma duplicação de 2,03 Mb na região de q11.1-q11.2 no cromossomo 15.