site-ul studiului și screening-ul subiectului

studiile clinice au fost efectuate la Centrul de Cercetare Clinică al spitalelor Universității din Michigan, cu aprobarea Comitetului de evaluare instituțională pentru studii care implică subiecți umani și de la Food and Drug Administration. Consimțământul informat a fost obținut de la fiecare subiect.

subiecții au fost evaluați în funcție de vârstă, greutate și capacitatea de a respecta protocoalele. Ei au fost examinați pentru sănătate/boală și utilizarea medicamentelor, alcoolului și tutunului. Sângele a fost evaluat pentru echilibrul electrolitic, funcția renală și hepatică și morfologia sângelui și lipidele. Concentrațiile de intrare necesare pentru studiul mecanismului au fost de 5, 18 mmol l−1 (>200 mg dl−1) colesterol total, 4, 14 mmol L−1 (>160 mg dl−1) colesterol lipoproteic cu densitate mică (LDL-colesterol) și 3.39 mmol L−1 (300 mg dl−1) trigliceride. Pentru studiul pe termen lung, colesterolul total a fost necesar să fie de 5,18-7,77 mmol l–1 (200-300 mg dl−1), LDL−colesterol 3,37 mmol l-1 (>130 mg dl−1) și trigliceride 4,52 mmol L−1 (400 mg dl−1). Femeile aflate la vârsta fertilă au fost examinate pentru sarcină și au fost instruite să utilizeze controlul nașterii în timpul studiului.

studiul mecanismului

dintre cei 12 subiecți, opt au fost femei cu vârsta medie de 39, 5 ani (Interval, 29-59) ani, colesterolul total mediu 6, 48 (interval, 5, 57–7.51) mmol L−1 (250 (interval, 215-290) mg dl−1) și greutatea medie 79,3 (interval, 58,3–116,3) kg. Valorile corespunzătoare pentru cei patru bărbați au fost de 36,5 (interval, 34-40) ani, 6,60 (5,57–7,64) mmol L−1 (255 (interval, 215-295) mg dl−1) colesterol total și 94,5 (interval, 84,5–106,8) kg.

au existat patru faze de studiu de 1 săptămână, cu o perioadă de eliminare de 1 săptămână între faze. În fiecare fază—administrată conform unui design randomizat, unic orb, încrucișat-subiecții au consumat 250 ml dintr—un desert de gelatină fără zahăr care conține fie 5 g HPMC (faze de testare), fie fără HPMC (faza placebo). Desertul de gelatină a fost consumat în timpul micului dejun, prânzului și cinei, pentru un total de 15 g de HPMC pe zi în timpul fiecărei faze de testare.

Vâscozitățile (măsurate în conformitate cu Farmacopeea Statelor Unite, 2003) ale desertului de gelatină din cele patru faze au fost: gelatină placebo (0,3 cP), HPMC cu vâscozitate medie (3915 cP), HPMC cu vâscozitate ridicată (22 703 cP) și HPMC cu vâscozitate ultra-ridicată (63 030 cP). Toate produsele HPMC (Dow Chemical Company, Midland, MI, SUA) au fost de calitate alimentară și au respectat Monografia hipromeloză Tip 2208 (Farmacopeea Statelor Unite, 2003).

aportul alimentar a fost controlat pe tot parcursul studiului privind mecanismul pentru a se asigura că singura diferență dietetică între grupuri a fost prezența sau absența HPMC. Subiecții au mâncat toate mesele la Centrul general de Cercetare Clinică, selectând mesele corespunzătoare dietei lor obișnuite. În săptămâna de studiu 1, toate alimentele consumate au fost inventariate. În fazele ulterioare, au fost reproduse tipurile și cantitățile de alimente consumate.

în zilele 1 și 8 ale fiecărei faze, după un post peste noapte, s-au măsurat greutatea, semnele vitale și lipidele serice. Electroliții, funcția hepatică și renală și morfologia sângelui au fost măsurate în prima și ultima zi de studiu.

efectul HPMC asupra absorbției grăsimilor a fost studiat prin măsurarea conținutului de grăsimi fecale. În timpul fazelor placebo și ultra-vâscozitate ridicată, toți subiecții au finalizat o colecție de scaune de 72 de ore în zilele 5, 6 și 7.

studiu pe termen lung

dintre cei 40 de subiecți, 20 au fost femei cu vârsta medie de 41,6 ani (Interval 27,3-55,9) ani, valoarea medie a colesterolului total seric 5,96 (interval 5,43–6,48) mmol l–1 (230,0 (interval 209,8−250,2) mg dl–1), Valoarea medie a colesterolului LDL 4,05 (interval 3,57−4,53) mmol l-1 (156.4 (Interval 137,9–174,9) mg dl−1) și greutatea medie 75,3 (interval 59,8–90,8) kg. Valorile corespunzătoare pentru cei 20 de bărbați au fost 38,3 (interval, 25,9–50,3) ani, 6,05 (interval, 5,46–6,63) mmol L−1 (233,4 (interval, 210,9–255,9) mg dl−1) colesterol total, 4,26 (interval, 3,74–4,78) mmol L−1 (164,4 (interval, 144,4–184,4) mg dl−1) LDL-colesterol și 87,9 (interval, 75,7–101,1) kg greutate.

două doze, 5 și 15 g zi−1, de HPMC cu vâscozitate ultra-ridicată au fost comparate cu placebo pentru capacitatea de scădere a colesterolului la subiecții ușor hipercolesterolemici, utilizând un design paralel randomizat, dublu-orb, controlat cu placebo. HPMC a fost administrat într−o băutură de ciocolată caldă cu mic dejun (5 și 15 g zi-1 grupuri de tratament) și în cookie−uri de zahăr-melasă cu prânz și cină (15 g zi-1 grup de tratament). Formularea cookie-urilor este detaliată în Swidan și colab. (1996).

Numărul de subiecți din fiecare grup de tratament a fost determinat prin calcule de putere bazate pe eficacitatea preconizată de scădere a colesterolului la cele două doze (estimată la 1% la sută pe G HPMC pe zi) și coeficienții de variație observați anterior în datele privind colesterolul total. Deși calculele de putere au indicat că cinci subiecți ar fi suficienți, 10 au fost înscriși pentru grupul de 15 g HPMC pe zi și 10 pentru grupul placebo, pentru a lua în considerare rata mai mică de hidratare a HPMC în cookie-uri și durata studiului. Douăzeci de subiecți au fost înrolați pentru grupul de 5 g HPMC pe zi, deoarece se aștepta ca efectul de scădere a colesterolului să fie mai modest.

băutura de ciocolată caldă care conține 5 g HPMC nu a fost acceptată de subiecți, care s-au plâns imediat cu voce tare de non-palatabilitatea sa și au amenințat că vor abandona studiul la sfârșitul săptămânii 1. Ulterior, a fost invocată o perioadă de eliminare de 1 săptămână pentru toți subiecții (săptămâna 2) și, începând cu săptămâna 3, toți subiecții testați au primit formularea de cookie-uri de 5 g HPMC în locul băuturii de ciocolată caldă de 5 g HPMC la micul dejun. Subiecții care au primit placebo au fost trecuți la un cookie placebo în locul ciocolatei calde placebo pentru a menține orbirea. Nu au existat plângeri ulterioare cu privire la palatabilitate. Protocolul pentru studiul pe termen lung este prezentat în tabelul 1.

studiul pe termen lung a fost un studiu ambulatoriu, subiecții raportând zilnic pentru a-și ridica (săptămâna 1), cookie-uri (săptămânile 1, 3-8) și orice formulare necesare. Subiecții și-au consumat mesele obișnuite împreună cu formulările de studiu. Jurnalele de alimente și exerciții fizice au fost înregistrate cu 1 săptămână înainte de studiu și în săptămânile 1, 4 și 8. Respectarea consumului formulărilor de testare a fost evaluată zilnic.

analiza probelor și chestionarului

măsurătorile biochimice și lipidice au fost efectuate la laboratoarele clinice ale spitalelor Universității din Michigan, folosind o metodă validată care prezintă o variație de 1% a concentrației colesterolului total (TC) în eșantion și o variație de 2,2% între zile. LDL-C a fost calculat din concentrațiile de colesterol TC, lipoproteine cu densitate mare (HDL-C) și TG folosind formula:

colecțiile de scaune au fost analizate de Clinica Mayo (Rochester, MN, SUA) folosind o procedură bazată pe RMN care implică uscarea cu microunde, urmată de estimarea procentajului de grăsime solidă și procentuală prin analiza semnalului protonilor rămași (Van de Kamer, 1958). Comparativ cu metoda gravimetrică standard stabilită, valorile pentru conținutul procentual solid și grăsime diferă cu 2 și, respectiv, 6%.

chestionarele privind efectele adverse au fost completate în ziua 1 a ambelor studii, în ziua 7 a fiecărei faze a studiului privind mecanismul și în ziua 7 în săptămânile 1, 3 și 6 din studiul pe termen lung. Subiecții au înregistrat dureri de cap, palpitații, amețeli, balonare, disconfort gastro-intestinal, crampe abdominale, diaree și flatulență după cum urmează: fără efect (0), efect ușor (1=Mai puțin de 30 min, 2=mai mult de 30 min), efect moderat (3=mai puțin de 30 min, 4=mai mult de 30 min) și efect sever (5=mai puțin de 30 min și 6=mai mult de 30 min). De asemenea, a fost prevăzut spațiu pentru ca subiecții să înregistreze alte efecte adverse.

numărul și consistența mișcărilor intestinale au fost raportate în zilele 5, 6 și 7 ale fazelor placebo și ultra-vâscozitate ridicată ale studiului privind mecanismul. Consistența mișcării intestinului a fost marcată după cum urmează: 1 (lichid), 2 (scaune libere, moi, fragmentate), 3 (scaun moale, dar continuu), 4 (scaun ferm) sau 5 (dificultate de trecere din cauza rigidității).

analiza statistică

în studiul mecanismului, toate măsurile, cu excepția grăsimii fecale, au fost testate pentru diferențe semnificative cu analiza repetată a varianței (Superanova, Abacus Concepts, Berkeley, CA, SUA) folosind Compromisul lui Tukey ca test post-hoc. Datele privind grăsimea fecală au fost analizate cu testul t asociat.

în studiul pe termen lung, datele au fost tratate cu univariate (de exemplu, F-statistica univariată neajustată) și multivariate (de exemplu Wilks Lambda) analiza măsurătorilor repetate ale varianței utilizând un pachet de analiză statistică SAS (SAS Institute Inc., Cary, NC, Statele Unite ale Americii). Cele două abordări au dat rezultate similare. Factorii analizați au fost săptămâna (în cadrul subiectului) și grupul de tratament, sexul și vârsta (între subiecți). Ipotezele nule au fost că nu au existat interacțiuni săptămânale, săptămânale după sex, săptămânale după vârstă sau săptămânale după grup.

toate diferențele au fost considerate semnificative la nivelul de încredere de 95%.