Dépistage du site d’étude et du sujet

Des essais cliniques ont été menés au Centre de recherche clinique des hôpitaux de l’Université du Michigan avec l’approbation de l’Institutional Review Board for Studies Involving Human Subjects et de la Food and Drug Administration. Le consentement éclairé a été obtenu de chaque sujet.

Les sujets ont été évalués en fonction de leur âge, de leur poids et de leur capacité à se conformer aux protocoles. Ils ont été dépistés pour leur santé / maladie et leur consommation de médicaments, d’alcool et de tabac. L’équilibre électrolytique, la fonction rénale et hépatique ainsi que la morphologie et les lipides sanguins ont été évalués dans le sang. Les concentrations d’entrée requises pour l’étude du mécanisme étaient de 5,18 mmol l−1 (> 200 mg dl−1) de cholestérol total, 4,14 mmol l−1 (> 160 mg dl−1) de cholestérol lipoprotéique de basse densité (cholestérol LDL) et 3.39 mmol l−1 (⩽300 mg dl-1) triglycérides. Pour l’étude à long terme, le cholestérol total devait être de 5,18 à 7,77 mmol l-1 (200 à 300 mg dl−1), le cholestérol LDL de 3,37 mmol l-1 (> 130 mg dl−1) et les triglycérides de 4,52 mmol l−1 (⩽400 mg dl−1). Les femmes en âge de procréer ont été dépistées pour la grossesse et ont reçu l’instruction d’utiliser le contrôle des naissances au cours de l’étude.

Étude du mécanisme

Sur les 12 sujets, huit étaient des femmes âgées en moyenne de 39,5 ans (plage de 29 à 59 ans), le cholestérol total moyen de 6,48 ans (plage de 5,57 à 7 ans).51) mmol l-1 (250 (plage, 215-290) mg dl−1) et poids moyen 79,3 (plage, 58,3–116,3) kg. Les valeurs correspondantes pour les quatre hommes étaient de 36,5 (plage, 34-40) ans, 6,60 (5,57–7,64) mmol l−1 (255 (plage, 215-295) mg dl−1) cholestérol total et 94,5 (plage, 84,5–106,8) kg.

Il y a eu quatre phases d’étude d’une semaine, avec une période de lavage d’une semaine entre les phases. Dans chaque phase — administrée selon un plan de croisement randomisé en une seule aveugle — les sujets ont consommé 250 ml d’un dessert à la gélatine sans sucre contenant soit 5 g de HPMC (phases de test), soit aucun HPMC (phase placebo). Le dessert à la gélatine a été consommé au petit-déjeuner, au déjeuner et au dîner, pour un total de 15 g de HPMC par jour pendant chaque phase de test.

Les viscosités (mesurées selon la Pharmacopée des États-Unis, 2003) du dessert à base de gélatine des quatre phases étaient: gélatine placebo (0,3 cP), HPMC à viscosité moyenne (3915 cP), HPMC à viscosité élevée (22 703 cP) et HPMC à viscosité ultra élevée (63 030 cP). Tous les produits HPMC (The Dow Chemical Company, Midland, MI, États-Unis) étaient de qualité alimentaire et conformes à la monographie Hypromellose Type 2208 (Pharmacopée des États-Unis, 2003).

L’apport alimentaire a été contrôlé tout au long de l’étude du mécanisme pour s’assurer que la seule différence alimentaire entre les groupes était la présence ou l’absence de HPMC. Les sujets ont mangé tous les repas au Centre de Recherche clinique générale, en sélectionnant les repas correspondant à leur régime alimentaire habituel. Au cours de la semaine d’étude 1, tous les aliments consommés ont été inventoriés. Dans les phases suivantes, les types et les quantités d’aliments consommés ont été reproduits.

Aux jours 1 et 8 de chaque phase, après un jeûne nocturne, le poids, les signes vitaux et les lipides sériques ont été mesurés. Les électrolytes, la fonction hépatique et rénale et la morphologie sanguine ont été mesurés les premier et dernier jours d’étude.

L’effet de l’HPMC sur l’absorption des graisses a été étudié en mesurant la teneur en matières grasses fécales. Pendant les phases placebo et ultra-haute viscosité, tous les sujets ont effectué une collecte de selles de 72 h aux jours 5, 6 et 7.

Étude à long terme

Sur les 40 sujets, 20 étaient des femmes âgées en moyenne de 41,6 (plage, 27,3-55,9) ans, cholestérol total sérique moyen 5,96 (plage, 5,43–6,48) mmol l–1 (230,0 (plage, 209,8−250,2) mg dl–1), cholestérol LDL moyen 4,05 (plage 3,57−4,53) mmol l-1 (156.4 (gamme 137,9–174,9) mg dl-1) et poids moyen 75,3 (gamme, 59,8–90,8) kg. Les valeurs correspondantes pour les 20 hommes étaient de 38,3 (plage, 25,9–50,3) ans, 6,05 (plage, 5,46–6,63) mmol l−1 (233,4 (plage, 210,9–255,9) mg dl−1) cholestérol total, 4,26 (plage, 3,74–4,78) mmol l−1 (164,4 (plage, 144,4–184,4) mg dl−1) LDL-cholestérol et 87,9 (plage, 75,7–101,1) kg de poids.

Deux doses, 5 et 15 g jour-1, d’HPMC à viscosité ultra élevée ont été comparées au placebo pour la capacité à abaisser le cholestérol chez des sujets légèrement hypercholestérolémiques, en utilisant un plan parallèle randomisé, en double aveugle, contrôlé par placebo. HPMC a été administré dans une boisson au chocolat chaud au petit-déjeuner (groupes de traitement de 5 et 15 g jour−1) et dans des biscuits à la mélasse de sucre au déjeuner et au dîner (groupe de traitement de 15 g jour−1). La formulation des cookies est détaillée dans Swidan et al. (1996).

Le nombre de sujets dans chaque groupe de traitement a été déterminé par des calculs de puissance basés sur l’efficacité hypocholestérolémiante attendue aux deux doses (estimée à ∼ 1% par g de HPMC par jour) et les coefficients de variation précédemment observés dans les données sur le cholestérol total. Bien que les calculs de puissance aient indiqué que cinq sujets seraient suffisants, 10 ont été inscrits pour le groupe HPMC de 15 g par jour et 10 pour le groupe placebo, afin de prendre en compte le taux d’hydratation inférieur de HPMC dans les cookies et la durée de l’étude. Vingt sujets ont été inscrits pour le groupe HPMC de 5 g par jour car l’effet hypocholestérolémiant devait être plus modeste.

La boisson au chocolat chaud contenant 5 g de HPMC n’a pas été acceptée par les sujets, qui se sont immédiatement plaints avec virulence de sa non-appétence et ont menacé d’abandonner l’étude à la fin de la semaine 1. Par la suite, une période de lavage de 1 semaine a été invoquée pour tous les sujets (semaine 2) et, à partir de la semaine 3, tous les sujets testés ont reçu la formulation de biscuits HPMC de 5 g au lieu de la boisson au chocolat chaud HPMC de 5 g au petit-déjeuner. Les sujets recevant le placebo ont été remplacés par un biscuit placebo au lieu du chocolat chaud placebo pour maintenir l’aveuglement. Il n’y a pas eu de plaintes subséquentes concernant l’appétence. Le protocole de l’étude à long terme est présenté dans le tableau 1.

L’étude à long terme était une étude ambulatoire, avec des sujets déclarant quotidiennement prendre leur boisson mélanger (semaine 1), biscuits (semaines 1, 3-8) et tous les formulaires nécessaires. Les sujets ont consommé leurs repas habituels avec les formulations de l’étude. Des journaux alimentaires et d’exercices ont été enregistrés 1 semaine avant l’étude et pendant les semaines 1, 4 et 8. La conformité à la consommation des formulations test a été évaluée quotidiennement.

Analyse d’échantillons et questionnaire

Des mesures biochimiques et lipidiques ont été effectuées dans les laboratoires cliniques des hôpitaux de l’Université du Michigan, en utilisant une méthode validée présentant une variation de 1% de la concentration de cholestérol total (TC) dans l’échantillon et une variation de 2,2% entre les jours. LDL-C a été calculé à partir des concentrations de TC, de cholestérol des lipoprotéines de haute densité (HDL-C) et de TG en utilisant la formule suivante:

Les collections de selles ont été analysées par la Mayo Clinic (Rochester, MN, USA) à l’aide d’une procédure basée sur la RMN impliquant un séchage par micro-ondes, suivi d’une estimation du pourcentage de solide et du pourcentage de graisse via une analyse du signal des protons restants (Van de Kamer, 1958). Par rapport à la méthode gravimétrique standard établie, les valeurs pour le pourcentage de matières solides et de matières grasses différaient de 2 et 6%, respectivement.

Les questionnaires concernant les effets indésirables ont été remplis le jour 1 des deux essais, le jour 7 de chaque phase de l’étude du mécanisme et le jour 7 pendant les semaines 1, 3 et 6 de l’étude à long terme. Les sujets ont noté des maux de tête, des palpitations, des étourdissements, des ballonnements, des malaises gastro-intestinaux, des crampes abdominales, de la diarrhée et des flatulences comme suit: aucun effet (0), effet léger (1 = moins de 30 min, 2 = plus de 30 min), effet modéré (3 = moins de 30 min, 4 = plus de 30 min) et effet sévère (5 = moins de 30 min et 6 = plus de 30 min). Un espace a également été prévu pour que les sujets puissent enregistrer d’autres effets indésirables.

Le nombre et la consistance des selles ont été rapportés aux jours 5, 6 et 7 des phases placebo et ultra-haute viscosité de l’étude du mécanisme. La consistance des selles a été notée comme suit: 1 (liquide), 2 (selles molles, fragmentées), 3 (selles molles mais continues), 4 (selles fermes) ou 5 (difficulté de passage due à la rigidité).

Analyse statistique

Dans l’étude du mécanisme, toutes les mesures, à l’exception de la graisse fécale, ont été testées pour des différences significatives avec des mesures répétées d’analyse de la variance (SuperAnova, Abacus Concepts, Berkeley, CA, USA) en utilisant le compromis de Tukey comme test post hoc. Les données sur les graisses fécales ont été analysées avec le test t apparié.

Dans l’étude à long terme, les données ont été traitées avec une analyse de variance à mesures répétées univariées (par exemple la statistique f univariée non ajustée) et multivariées (par exemple Wilks Lambda) à l’aide d’un ensemble d’analyses statistiques SAS (SAS Institute Inc., Cary, NC, États-Unis). Les deux approches ont donné des résultats similaires. Les facteurs analysés étaient la semaine (au sein du sujet) et le groupe de traitement, le sexe et l’âge (entre les sujets). Les hypothèses nulles étaient qu’aucune interaction semaine, semaine par sexe, semaine par âge ou semaine par groupe n’existait.

Toutes les différences ont été considérées comme significatives au niveau de confiance de 95 %.