Selezionare una Colonna a Scambio Anionico

La scelta di una colonna a scambio anionico dipende da una serie di fattori che influenzano la separazione cromatografica, tra cui il carico le caratteristiche della molecola bersaglio(s) e altre molecole del campione, il volume e la concentrazione del campione, e la portata e la pressione dei limiti del sistema di cromatografia. Bio-Rad offre una vasta gamma di colonne di scambio di anioni per soddisfare le vostre esigenze. I diversi tipi di scambio anionico colonne sono stati ottimizzati per un certo numero di applicazioni:

Associazione e di contropressione proprietà di UNOsphere Q supporto:
5 mg/ml di BSA in 10 mMTris, pH8.5, è stata caricata su un 1.1 x 20 cm di colonna. Rosso, contropressione; blu, 10% breakthrough capacità.

• ad Alta risoluzione separazioni
• Applicazioni da preparatorio di separazioni per la lucidatura
• in Esecuzione a bassa, media, o ad alta velocità di flusso
• Copertura di diversi analiti intervalli di dimensioni
• Compatibilità con comunemente utilizzati sistemi tampone e sali
• Matrici con forte o debole gruppi funzionali
• Diversa matrice tipi tra cui macroporoso e continuo poroso
• Bassa contropressione
• Compatibilità con campioni differenti viscosità e temperatura di esercizio.

Scambio anionico Colonna Design

a scambio Ionico la cromatografia viene utilizzata per separare le molecole cariche. In una colonna di scambio anionico, l’imballaggio viene caricato positivamente e quindi trattiene le molecole caricate negativamente dall’interazione coulombica. Le molecole legate sono eluite con un gradiente anionico. Per molecole con più gruppi di carica, come le proteine, è la carica complessiva in una data chimica tampone(pH, ecc.) che determina se e quanto fortemente la molecola si legherà alla fase stazionaria della colonna.

Le colonne di cromatografia a scambio anionico sono disponibili con matrici con gruppi funzionali forti o deboli. La matrice di scambio di anioni forti è ammonio quaternario ed è designata Q. La matrice di scambio di anioni deboli è dietilaminoetil, o DEAE. Una resina di resistenza intermedia, che contiene principalmente terziario con alcune ammine quaternarie, è disponibile anche.

Il pH del buffer nella colonna determina la carica di ciascuno dei costituenti in un campione. La carica di forti resine a scambio anionico è minimamente alterata da una variazione del pH e può funzionare su un ampio intervallo di pH. DEAE è più influenzato dai cambiamenti nel pH, con un normale intervallo operativo di pH 7-10.

La disponibilità di un intervallo di pH di lavoro più ampio con forti colonne di scambio anionico fornisce la possibilità di utilizzare il pH per modificare la carica netta delle molecole bersaglio per farle legare più fortemente, più debolmente o per niente. La cromatografia può essere eseguita in modo positivo, dove il bersaglio(s) di interesse si legano fortemente alla colonna e (molte) altre molecole non si legano così fortemente. La modalità negativa è comune nella lucidatura, dove i contaminanti si legano alla colonna di scambio anionico e la molecola bersaglio non si lega e quindi non viene trattenuta sulla colonna.

L’eluizione viene solitamente ottenuta con un gradiente di sale. Gli ioni più comuni sono PO43 -, SO42–, COO–e Cl -. La scelta dell’anione dipende dal profilo di eluizione desiderato e da quali ioni sono compatibili con la futura purificazione o l’uso futuro dell’analita(i).

Applicazioni delle colonne di scambio anionico

Le colonne di scambio anionico sono ampiamente utilizzate per la purificazione di biomolecole. Esiste un’ampia selezione di tipi di colonne, dimensioni e diversi punti di forza dei gruppi funzionali. In combinazione con condizioni di legame ed eluizione ottimizzate, la cromatografia a colonna a scambio anionico può essere utilizzata in tutte le fasi dell’isolamento e dell’analisi delle biomolecole, compresa la pulizia iniziale, la purificazione, la separazione degli analiti e la rimozione di contaminanti come endotossine, proteine delle cellule ospiti o composti ionici.