Proliferazione B
La proliferazione cellulare è uno degli eventi precedenti di attivazione delle cellule B, che è necessario espandere il pool di cellule B attivate dall’antigene e garantire un livello sufficiente di risposta immunitaria. La proliferazione delle cellule B può essere attivata in vitro in diversi modi. L’impegno di BCR serve come stimolo primario ma, inoltre, diverse molecole costimulatorie o recettori accessori, come CD38, CD40 e CD19, possono stimolare direttamente la proliferazione delle cellule B o ridurre la soglia di attivazione delle cellule B da parte degli antigeni (Barrington et al., 2009; Chen e Ross, 2005, 2007). Gli agonisti del recettore toll-like (TLR), come LPS e CpG DNA, sono mitogeni multipotenti che stimolano la proliferazione delle cellule B policlonali tramite TLR 4 e 9, rispettivamente (Hoshino et al., 1999; Krieg et al., 1995). Recentemente, è stato dimostrato che un gruppo di antigeni glicolipidi può stimolare la proliferazione delle cellule B attraverso la molecola MHC di classe I-like CD1d, presente su alcune cellule B (Brigl e Brenner, 2010; Lang et al., 2008), così come le cellule mieloidi. L’antigene prototipo e più spesso studiato per CD1d è alfa-galattosilceramide, un lipido estratto da una spugna marina; tuttavia, gli antigeni glicolipidi endogeni delle cellule di mammifero attivano anche CD1d (Zhou et al., 2004).
RA svolge vari ruoli per regolare l’attivazione e la differenziazione delle cellule B attraverso le sue influenze su questi sistemi di segnalazione intrinseca. Diverse linee di evidenza hanno dimostrato che la regolazione della proliferazione delle cellule B da parte di RA dipende dalla natura dello stimolo incontrato. A livello fisiologico (circa 5-20 nM), RA ha inibito il tasso di proliferazione delle cellule B del sangue periferico umano purificato stimolate dall’anticorpo anti-μ (Blomhoff et al., 1992). In murino ingenuo B cellule stimolate con anti-μ per avviare BCR segnalazione e con anti-CD38 per la legatura del CD38 molecola sulla superficie delle cellule B, la proliferazione è stata ridotta in tutta la popolazione, ma un gruppo di grandi dimensioni, meno di ciclismo, e più differenziato cellule B è emerso nel corso del tempo, e queste cellule espresso più di superficie(s) Ig, indicativo di una maggiore progressione verso diventare anticorpo-secernenti Pc (Chen e Ross, 2005). In un modello in vitro di attivazione delle cellule B dipendenti dalle cellule T, RA ha ridotto la proliferazione delle cellule B indotta dalla legatura del BCR e del CD40 e da LPS (Chen e Ross, 2005, 2007). La riduzione della proliferazione delle cellule B da parte di RA in condizioni di vari stimoli suggerisce il coinvolgimento di una via comune con conseguente regolazione negativa del ciclo cellulare e della crescita, quando le cellule B sono stimolate dal cross-linking dei recettori BCR-correlati e TLR4. Naderi e Blomhoff (1999) hanno dimostrato che la riduzione della proliferazione delle cellule B nelle normali cellule B periferiche umane è stata preceduta dall’arresto del ciclo cellulare, come evidenziato dall’espressione alterata di diversi fattori regolatori del ciclo cellulare. Una regolazione negativa della via NF-kB può anche contribuire all’effetto inibitorio della RA sulla proliferazione cellulare, poiché i membri della famiglia NF-kB svolgono un ruolo importante nel controllo dello sviluppo e della proliferazione delle cellule B (Chen et al., 2002; Siebenlist et al., 2005). Studi di una linea cellulare B-linfoide in coltura hanno anche dimostrato che l’AR sopprime la proliferazione bloccando il canale del calcio ionizzato, che media la risposta precoce del calcio dopo la legatura BCR (Bosma e Sidell, 1988).
In contrasto con l’effetto inibitorio di RA sulla proliferazione delle cellule B stimolata dalla legatura BCR e LPS come discusso sopra, RA ha aumentato la proliferazione delle cellule B della memoria quando le cellule B sono state stimolate con DNA CpG, che induce l’attivazione cellulare attraverso TLR9 (Eresvag et al., 2007). L’aumento del tasso di proliferazione delle cellule B è stato accompagnato da un aumento della secrezione di anticorpi. In uno studio meccanicistico, Eresvag et al. (2007) ha dimostrato che la maggiore proliferazione e differenziazione da parte di RA corrispondeva all’attivazione della via p38 MAPK che ha portato alla fosforilazione della proteina del retinoblastoma e ha aumentato il livello di ciclina D, fattori che stimolano la progressione del ciclo cellulare. Inoltre abbiamo anche osservato che RA aumenta la proliferazione delle cellule B purificate della milza murina stimolate da α-galattosilceramide, un ligando per il recettore CD1d, che è stato correlato con la differenziazione delle cellule B, evidenziata dall’espressione sIgG1 e CD138 (Q. Chen, dati inediti), mentre allo stesso tempo RA ha ridotto la proliferazione di cellule B identiche stimolate da LPS.
Questi risultati contrastanti implicano che l’AR influenza la proliferazione delle cellule B in modo differenziato, in un modo che dipende dalla sottopopolazione delle cellule B e dallo stimolo. Mentre RA inibisce la proliferazione delle cellule B mature, che può facilitare la loro differenziazione delle cellule B attivate verso PC, RA promuove l’espansione di un sottoinsieme di cellule B che subiscono un’ulteriore differenziazione (Chen e Ross, 2005), entrambi i processi che portano alla promozione della produzione di anticorpi. Inoltre, mentre i livelli fisiologici di RA inibivano la proliferazione delle cellule B, RA alla stessa concentrazione impediva anche l’apoptosi spontanea dei linfociti B (Lomo et al., 1998), suggerendo inoltre che sebbene RA inibisca la proliferazione delle cellule B mature, funziona per mantenere il pool funzionale delle cellule B, come richiesto per una risposta efficace della memoria. Ulteriori studi sono necessari per definire meglio se è lo stadio di attivazione delle cellule B di per sé (naïve o memoria) o lo stimolo stesso, o entrambi, che determina se RA promuove o inibisce il ciclo e la proliferazione delle cellule B.