Studie-site en het onderwerp screening

de Klinische studies werden uitgevoerd in de Klinische Research Center van De Universiteit van Michigan Ziekenhuizen met goedkeuring van de Institutional Review Board voor Studies met Menselijke Proefpersonen en van de Food and Drug Administration. Van elke proefpersoon werd geïnformeerde toestemming verkregen.

patiënten werden beoordeeld op basis van leeftijd, gewicht en het vermogen om de protocollen na te leven. Ze werden gescreend op gezondheid/ziekte, en het gebruik van medicijnen, alcohol en tabak. Bloed werd beoordeeld op elektrolytenbalans, nier-en leverfunctie en bloedmorfologie en lipiden. De vereiste instapconcentraties voor de mechanism-studie waren 5,18 mmol l−1 (>200 mg dl−1) totaal cholesterol, 4,14 mmol L−1 (>160 mg dl-1) lipoproteïne-cholesterol met lage dichtheid (LDL-cholesterol) en 3.39 mmol L−1 (⩽300 mg dl-1) triglyceriden. Voor de langetermijnstudie was het totaal cholesterol nodig van 5,18-7,77 mmol L–1 (200-300 mg dl−1), LDL−cholesterol 3,37 mmol L-1 (>130 mg dl−1) en triglyceriden 4,52 mmol L−1 (⩽400 mg dl−1). Vrouwen in de vruchtbare leeftijd werden gescreend op zwangerschap en geïnstrueerd om anticonceptie te gebruiken tijdens het onderzoek.

Mechanism study

van de 12 proefpersonen waren acht vrouwen met een gemiddelde leeftijd van 39,5 jaar (bereik, 29-59) jaar, gemiddeld totaal cholesterol 6,48 (bereik, 5,57-7.51) mmol L−1 (250 (bereik, 215-290) mg dl-1)en gemiddeld gewicht 79,3 (bereik, 58,3–116,3) kg. Overeenkomstige waarden voor de vier mannen waren 36,5 (bereik 34-40) jaar, 6,60 (5,57–7,64) mmol L−1 (255 (bereik 215-295) mg dl−1) totaal cholesterol en 94,5 (bereik 84,5–106,8) kg.

Er waren vier onderzoeksfasen van 1 week, met een wash-outperiode van 1 week tussen de fasen. In elke fase—toegediend volgens een gerandomiseerd, enkelblind, crossover-ontwerp—namen de proefpersonen 250 ml van een suikervrij gelatinedessert dat ofwel 5 g HPMC (testfasen) of geen HPMC (placebofase) bevat. Het gelatinedessert werd geconsumeerd tijdens ontbijt, lunch en diner, voor een totaal van 15 g HPMC per dag tijdens elke testfase.

viscositeiten (gemeten volgens de United States Pharmacopeia, 2003) van de gelatine dessert uit de vier fasen waren: placebo gelatine (0,3 cP), medium-viscositeit HPMC (3915 cP), hoge-viscositeit HPMC (22 703 cP) en ultra-hoge viscositeit HPMC (63 030 cP). Alle HPMC-producten (the Dow Chemical Company, Midland, MI, VS) waren food grade en voldeden aan de monografie Hypromellose Type 2208 (United States Pharmacopeia, 2003).

de voedselinname werd gedurende de hele mechanism-studie onder controle gehouden om er zeker van te zijn dat het enige verschil in de voeding tussen de groepen de aanwezigheid of afwezigheid van HPMC was. Proefpersonen aten alle maaltijden in het General Clinical Research Center, het selecteren van maaltijden die overeenkomen met hun gebruikelijke dieet. In studieweek 1 werd al het geconsumeerde voedsel geïnventariseerd. In de daaropvolgende fasen werden de soorten en hoeveelheden geconsumeerde levensmiddelen gereproduceerd.

Op Dag 1 en 8 van elke fase werden, na een snelle nacht, gewicht, vitale functies en serumlipiden gemeten. Op de eerste en laatste studiedagen werden elektrolyten, lever-en nierfunctie en bloedmorfologie gemeten.

het effect van HPMC op de vetabsorptie werd bestudeerd door meting van het fecale vetgehalte. Tijdens de placebo-en ultra-hoge-viscositeitsfase voltooiden alle proefpersonen een 72-uur stoelgangverzameling op dag 5, 6 en 7.

Lange-termijn studie

Van de 40 proefpersonen, 20 waren vrouwen met een gemiddelde leeftijd 41.6 (bereik, 27.3–55.9) jaar, met een gemiddeld serum totaal cholesterol 5.96 (bereik, 5.43–6.48) mmol l−1 (230.0 (bereik, 209.8–250.2) mg dl−1), de gemiddelde LDL-cholesterol 4.05 (bereik 3.57–4.53) mmol l−1 (156.4 (bereik 137,9–174,9) mg dl-1)en gemiddeld gewicht 75,3 (bereik 59,8–90,8) kg. De overeenkomstige waarden voor de 20 mannen waren 38.3 (bereik, 25.9–50.3) jaar, 6.05 (bereik, 5.46–6,63 is) mmol l−1 (233.4 (bereik, 210.9–255.9) mg dl−1) totaal cholesterol, 4.26 (bereik, 3.74–4.78) mmol l−1 (164.4 (bereik, 144.4–184.4) mg dl−1) LDL-cholesterol en 87.9 (bereik, 75.7–101.1) kg gewicht.

twee doses, 5 en 15 g dag−1, van ultrahoge viscositeit HPMC werden vergeleken met placebo voor het cholesterolverlagend vermogen bij licht hypercholesterolemische proefpersonen, met behulp van een gerandomiseerde, dubbelblinde, placebogecontroleerde, parallelle opzet. HPMC werd toegediend in een warme chocoladedrank bij het ontbijt (5 en 15 g dag−1 behandelgroepen) en in suiker-melasse koekjes bij lunch en diner (15 g dag−1 behandelgroep). De cookieformulering is beschreven in Swidan et al. (1996).

het aantal proefpersonen in elke behandelingsgroep werd bepaald door vermogensberekeningen op basis van de verwachte cholesterolverlagende werkzaamheid bij de twee doses (geschat op ∼1% per g HPMC per dag) en eerder waargenomen variatiecoëfficiënten in totaal cholesterolgegevens. Hoewel vermogensberekeningen aantoonden dat vijf proefpersonen voldoende zouden zijn, werden er 10 ingeschreven voor de 15 g HPMC per daggroep en 10 voor de placebogroep, om rekening te houden met de lagere hydratatiegraad van HPMC in de cookies en de duur van het onderzoek. Twintig proefpersonen werden ingeschreven voor de 5 g HPMC per daggroep omdat het cholesterolverlagende effect naar verwachting bescheidener zou zijn.

de warme chocoladedrank met 5 g HPMC werd niet geaccepteerd door de proefpersonen, die onmiddellijk luidruchtig klaagden over de niet-smakelijke smaak en dreigden het onderzoek aan het einde van week 1 te staken. Vervolgens werd een wash-outperiode van 1 week ingeroepen voor alle proefpersonen (week 2) en, te beginnen met week 3, kregen alle proefpersonen de 5 g HPMC-cookieformulering in plaats van de 5 g HPMC-warme chocoladedrank bij het ontbijt. Proefpersonen die de placebo kregen, werden overgeschakeld op een placebo-koekje in plaats van de placebo-warme chocolademelk om verblindend te blijven. Er waren geen verdere klachten over de smakelijkheid. Het protocol voor het langetermijnonderzoek is weergegeven in Tabel 1.

de langetermijn-studie was een poliklinische studie, waarbij proefpersonen dagelijks rapporteerden om hun drankmix op te halen (week 1), cookies (week 1, 3-8) en eventueel benodigde formulieren. Proefpersonen gebruikten hun gebruikelijke maaltijden samen met de onderzoeksformuleringen. Voedsel-en inspanningsdagboeken werden 1 week voor de studie en in week 1, 4 en 8 geregistreerd. De overeenstemming met de consumptie van de testformuleringen werd dagelijks beoordeeld.

analyse van monsters en vragenlijst

biochemische en lipidemetingen werden uitgevoerd in de klinische laboratoria van de Ziekenhuizen van de Universiteit van Michigan, waarbij gebruik werd gemaakt van een gevalideerde methode die een variatie van 1% in de totale cholesterol (TC) – concentratie in het monster en een variatie van 2,2% tussen de dagen vertoonde. LDL-C werd berekend uit de concentraties TC, high-density lipoproteïne cholesterol (HDL-C) en TG met behulp van de formule:

Stoelverzamelingen werden geanalyseerd door de Mayo Clinic (Rochester, MN, USA) met behulp van een NMR-gebaseerde procedure met microgolfdroging, gevolgd door een schatting van het percentage vaste en het percentage vet via signaalanalyse van de resterende protonen (van de Kamer, 1958). In vergelijking met de vastgestelde, standaard gravimetrische methode verschilden de waarden voor het percentage vaste stoffen en het vetgehalte met respectievelijk 2 en 6%.

vragenlijsten met betrekking tot bijwerkingen werden ingevuld op dag 1 van beide onderzoeken, op dag 7 van elke fase van het mechanisme-onderzoek en op dag 7 gedurende week 1, 3 en 6 in het langetermijnonderzoek. Hoofdpijn, hartkloppingen, duizeligheid, opgeblazen gevoel, maag-darmklachten, buikkrampen, diarree en flatulentie werden als volgt vastgesteld: geen effect (0), licht effect (1=minder dan 30 min, 2=meer dan 30 min), matig effect (3=minder dan 30 min, 4=meer dan 30 min) en ernstig effect (5=minder dan 30 min en 6=meer dan 30 min). Er werd ook ruimte geboden voor de proefpersonen om andere bijwerkingen te registreren.

het aantal stoelgang en de consistentie werden gerapporteerd op de dagen 5, 6 en 7 van de placebo-en ultra-hoge-viscositeitsfasen van het mechanisme-onderzoek. De consistentie van de stoelgang werd als volgt beoordeeld: 1 (vloeistof), 2 (losse, zachte, gefragmenteerde ontlasting), 3 (zachte maar continue ontlasting), 4 (stevige ontlasting) of 5 (moeite met passage door stijfheid).

statistische analyse

in de mechanism study werden alle metingen, met uitzondering van fecaal vet, getest op significante verschillen met herhaalde variantiemetingen (SuperAnova, Abacus Concepts, Berkeley, CA, USA) met behulp van Tukey ‘ s Compromise als een post-hoc test. Fecale vet gegevens werden geanalyseerd met de gepaarde t-test.

in de langetermijnstudie werden gegevens behandeld met univariate (bijvoorbeeld de niet-aangepaste univariate f-statistiek) en multivariate (bijvoorbeeld Wilks Lambda) herhaalde variantiemetingen met behulp van een SAS Statistical Analysis Package (SAS Institute Inc., Cary, NC, USA). De twee benaderingen leverden vergelijkbare resultaten op. De geanalyseerde factoren waren week (binnen de proefpersonen) en behandelingsgroep, geslacht en leeftijd (tussen proefpersonen). De nulhypothesen waren dat er geen interacties van week, week-per-geslacht, week-per-leeftijd of week-per-groep bestonden.

alle verschillen werden significant geacht bij een betrouwbaarheidsniveau van 95%.